人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分化為胰島素分泌細(xì)胞的代謝生物標(biāo)識(shí)的核磁共振頻譜研究.pdf

1、目的:
　　研究利用9.4T離體型、高分辨率核磁共振頻譜(Magnetic Resonance Spectroscopy, MRS)探尋人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(Human Umbilical Cord Wharton’s Jelly-derived Mesenchymal Stem Cells,huMSCs)和其分化為胰島素分泌細(xì)胞后的特征性代謝物;并且追蹤和鑒定huMSCs向胰島素分泌細(xì)胞的分化過程。
　　方法:
　　收

2、集足月健康剖宮產(chǎn)出生新生兒的臍帶并分離培養(yǎng)huMSCs及huMSCs在胰島細(xì)胞培養(yǎng)條件(以含0.1mmol/Lβ-巰基乙醇、10ug/L bFGF的H-DMEM誘導(dǎo)至干細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)改變,換用含10mmol/L尼克酰胺的H-DMEM繼續(xù)約6天成胰島素分泌細(xì)胞誘導(dǎo))下定向誘導(dǎo)其分化。倒置相差顯微鏡下觀察誘導(dǎo)后細(xì)胞形態(tài);雙硫腙染色鑒定鋅離子表達(dá)證明分化模型的成功;1H-MRS數(shù)據(jù)采集使用離體型9.4T高分辨率核磁共振頻譜儀(Bruker Av

3、ance400MHz)。所獲取頻譜數(shù)據(jù)在頻率域經(jīng)過XWINNMR(Bruker GmBH)軟件初步處理后,再應(yīng)用Mestre-c4.7軟件進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:
　　經(jīng)藥物誘導(dǎo)后huMSCs由長梭形逐漸變?yōu)槎嘟切巍㈩悎A形部分聚集成團(tuán);雙硫腙染色實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)后的細(xì)胞,可見胞漿被染成棕紅色,未行誘導(dǎo)的細(xì)胞無明顯變化,行高分辨率核磁共振頻譜獲取的間充質(zhì)干細(xì)胞譜線質(zhì)量及重復(fù)性良好。間充質(zhì)干細(xì)胞頻譜中可見主要代謝物包括膽堿復(fù)合物、谷氨酰胺

4、、乙酸、賴氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、丙氨酸。間充質(zhì)干細(xì)胞在誘導(dǎo)成胰島樣細(xì)胞后異亮氨酸、纈氨酸、賴氨酸呈上升趨勢,分別從3.44±0.54、0.65±0.14、0.16±0.074 nmM上升至4.66±0.42(p<0.05)、1.05±0.21(p<0.05)、0.31±0.052 nmM(p<0.05),谷氨酸呈下降趨勢,從0.17±0.058 nmM下降至0.064±0.089 nmM(p<0.05),丙氨酸及亮氨酸無明顯變