納米載體介導(dǎo)的hTERT反義寡核苷酸在體內(nèi)外對(duì)EC9706細(xì)胞端粒酶表達(dá)的影響.pdf

1、鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文納米載體介導(dǎo)的hTERT反義寡核苷酸在體內(nèi)外對(duì)EC9706細(xì)胞端粒酶表達(dá)的影響姓名：王瑾申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：李惠翔張振中20070501鄭州犬學(xué)2007屆碩士畢業(yè)論文納米載體介導(dǎo)的hTFRT反義寡棱苷酸在體內(nèi)外對(duì)EC9706細(xì)胞端豐亟酶表選的影響(oligonucleotides，ODNs)易被胞內(nèi)核酸酶降解，作用效果較差。因此，尋找合遁的基兇載體保護(hù)和攜帶ODNs，使其進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮

2、作用是基因治療的關(guān)鍵。研究者們利用各種不同的病毒或非病毒基因載體保護(hù)和攜帶ODNs，目前多聚陽離子載體以其穩(wěn)定、易制各、易進(jìn)行化學(xué)修飾及可以縮合ODN分子形成納米微粒等獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，保護(hù)ODN免受核酸酶的降解的同時(shí)，提高了轉(zhuǎn)染效率，H益受到廠‘泛關(guān)注，這其中聚乙烯亞胺(polyethylenimine，PEI)作為一種新型的多聚陽離子納米載體，是近年來最有臨床應(yīng)用潛能的非病毒基因載體，可以分為線型PEI(1inepolyethylenim

3、ine，LPEI)和分支型PEI(branch—polyetIlylenimine，BPEI)兩種類型，不僅有較強(qiáng)的結(jié)合ODN和粘附細(xì)胞的能力，而且可偶聯(lián)k導(dǎo)向配體等，合成更復(fù)雜的ODN釋放系統(tǒng)，文獻(xiàn)報(bào)道NGR(N：天冬酰氨酸，G：氨基乙酸，R：精氨酸)多肽，可以與腫瘤新生血管受體CDl3特異性結(jié)合，具有靶向腫瘤細(xì)胞特l、，用于體內(nèi)基因治療。本實(shí)驗(yàn)中制備了線型一聚乙烯亞胺(L—PEI)／端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)反義寡核苷酸(ASOD

4、N)納米復(fù)合物，在體外轉(zhuǎn)染食管癌細(xì)胞株(EC9706)，同時(shí)制備了NGR修飾的L—PEI／ASODN靶向納米復(fù)合物，靜脈注射入裸鼠體內(nèi)，分別觀察hTERTASODN對(duì)EC9706細(xì)胞的hTERT基岡、蛋白表達(dá)的影響，試圖驗(yàn)證體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中NGR／PEI／ASODN靶向納米復(fù)合物的穩(wěn)定性和可‘行性，為其靶向腫瘤的治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為該新型納米載體在食管癌治療中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。方法和材料：1設(shè)計(jì)互補(bǔ)丁hTERTDNA的ASODN，及一條1F

5、義寡核苷酸fsenseoligodeoxynucleotides，SODN)，制備L—PEl／ASODN納米復(fù)合物，轉(zhuǎn)染EC9706細(xì)胞。2體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方法21食管癌EC9706細(xì)胞，用含lO％優(yōu)質(zhì)胎牛血清的RPMI—1640培養(yǎng)基，于37℃、5％C02飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。22實(shí)驗(yàn)分組：cell組：ASODN組：RPMI一164010％胎牛血清培養(yǎng)液(空白對(duì)照組)RPMI1640lO％o／]fi牛血清培養(yǎng)液加入ASODN溶液