柞蠶核型多角體病毒細(xì)胞凋亡蛋白抑制因子的表達(dá)及其功能分析.pdf

1、細(xì)胞凋亡是昆蟲宿主細(xì)胞抗病毒感染及控制病毒復(fù)制增殖的一個重要分子機制。桿狀病毒細(xì)胞凋亡蛋白抑制因子(IAP)在調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的過程中起著重要的作用，但其作用的靶分子蛋白及機理仍不清楚。柞蠶是我國特有的經(jīng)濟昆蟲，受到柞蠶核型多角體病毒(ApMNPV)的危害，其產(chǎn)量和質(zhì)量受到直接影響。ApMNPV基因組編碼兩個可能的細(xì)胞凋亡蛋白抑制因子(Ap-IAP1和Ap-IAP2)，我們對它們的性質(zhì)、功能及在柞蠶抗病毒防御機制上的作用不了解。
　　

2、本文通過基因表達(dá)分析、體外蛋白質(zhì)相互作用、體內(nèi)基因干擾等方法分析這兩個蛋白質(zhì)在抑制細(xì)胞凋亡過程中的作用。實驗結(jié)果表明:(1)分析了Ap-iap1和iap2基因5'端和3'端非編碼區(qū)序列;ApMNPV△ph/egfp+能夠感染TnHi-5細(xì)胞，能夠表達(dá)EGFP蛋白;Ap-iap1和Ap-iap2基因在病毒感染早期即有轉(zhuǎn)錄表達(dá)，但轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平低于DNA pol基因。(2)體外表達(dá)的Ap-IAP1和Ap-IAP2都具有蛋白質(zhì)結(jié)合能力，Ap-I

3、AP1既能夠自身結(jié)合，也可以與Ap-IAP2結(jié)合。(3) ApMNPV感染Tn-Hi5細(xì)胞后可抑制放線菌素D誘導(dǎo)的細(xì)胞類caspase-3蛋白酶活性;RNAi方法證實干擾Ap-iap1基因表達(dá)能降低ApMNPV抑制細(xì)胞凋亡的作用，同時降低Ap-iap2和DNApol基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)，干擾Ap-iap2基因表達(dá)也能降低Ap-iap1和DNA pol基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。根據(jù)上述結(jié)果，我們認(rèn)為Ap-IAP1在ApMNPV抑制細(xì)胞凋亡中起作用，Ap-I