精子發(fā)生障礙患者復(fù)雜染色體平衡易位分析及USP26基因序列改變研究.pdf

1、本研究分為兩部分:第一部分對1例罕見染色體重排合并少弱畸精子癥不育患者用細(xì)胞遺傳學(xué)及分子遺傳學(xué)方法做詳細(xì)深入的研究,以探討染色體重排導(dǎo)致的減數(shù)分裂阻滯與精子發(fā)生衰竭之間關(guān)系,擴(kuò)大染色體疾病的表型譜。
　　 方法:患者,男,29歲,于2009年因原發(fā)性不育癥和少弱畸精子癥就診。經(jīng)高分辨染色體核型分析發(fā)現(xiàn)患者13號染色體畸變。用雙色熒光原位雜交和多色熒光原位雜交技術(shù)進(jìn)行驗證并排除染色體間的易位,還用寡核苷酸陣列比較基因組雜交方法精確

2、分析患者13號染色體是否存在拷貝數(shù)缺失及斷裂點(diǎn)。對初級精母細(xì)胞進(jìn)行FISH分析,以期發(fā)現(xiàn)精子發(fā)生衰竭的原因。
　　 結(jié)果:患者雙色FISH分析顯示線性染色體和環(huán)狀染色體都來源于13號染色體,環(huán)狀染色體形成新著絲粒。M-FISH檢測未發(fā)現(xiàn)染色體易位,比較基因組雜交檢測顯示13號染色體確定斷裂點(diǎn)在q12.3位置,無已知基因的缺失。最終核型為47,XY,+del(13)(pter→q12.3::q22→qter),+neo(13)(:

3、:q12.3→q22::)[97].ish del(13)(wcp13+,D13Z1+,13qter+,13q14-),neo(13)(wcpl3+,13q14+,D13Z1-,13qter-)[10]/46,XY,del(13)(pter→q12.3::q22→qter)[3]。患者生精阻滯主要發(fā)生在初級精母細(xì)胞階段。生精細(xì)胞-FISH結(jié)果顯示,減數(shù)分裂過程中2條13號染色體不能正常配對,這可能是精子發(fā)生障礙的原因。鑒于患者嚴(yán)重少精子

4、,建議實施供精人工受精。
　　 結(jié)論:該患者少弱畸精子臨床表型可能是染色體重排干擾了減數(shù)分裂中染色體聯(lián)會過程的結(jié)果,這導(dǎo)致生精阻滯在精母細(xì)胞階段。該病例核型首次報告。
　　 第二部分對精子發(fā)生障礙患者進(jìn)行USP26基因序列分析,以檢驗USP26基因序列改變與生精能力之間的關(guān)系,為臨床診斷精子發(fā)生障礙尋找可能途徑。
　　 方法:對USP26基因序列多態(tài)性分析:參與者根據(jù)生育情況分為生育和不育兩組。不育組156例,患

5、者染色體核型正常、AZF微缺失檢測無缺失。86例對照組成員均在婚后2年內(nèi)正常生育。對參與者進(jìn)行USP26基因測序,并分析USP26蛋白序列保守性,進(jìn)行USP26蛋白二、三級結(jié)構(gòu)預(yù)測。
　　 結(jié)果:本研究在USP26基因序列中發(fā)現(xiàn)了6種序列改變g.370-371insACA,g.494T＞C,g.1423C＞T,g.508G＞A,g.576G＞A,g.1044T＞A。除同義突變g.576G＞A外,其它5種序列改變頻率在不育和生育對