缺血后處理對肺缺血-再灌注損傷時細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因的干預(yù).pdf

1、目的:
　　 1.研究細(xì)胞凋亡和肺缺血/再灌注損傷(LIRI)的關(guān)系；
　　 2.探討缺血后處理(IPO)防治LIRI的作用及對肺細(xì)胞凋亡及其相關(guān)基因的影響。
　　 方法:
　　 1.雄性SD大鼠32只(體重220～250g),隨機(jī)分成隨機(jī)分成4組(n=8),即對照組(C組)、肺缺血/再灌注組(I/R組)、肺缺血/再灌注+缺血預(yù)處理組(IPC組)、肺缺血/再灌注+缺血后處理組(IPO組)。麻醉后左側(cè)開胸,

2、游離肺門,穿過阻斷帶,復(fù)制在體原位單肺缺血/再灌注模型。C組左肺門過阻斷帶后不阻斷肺門,觀察2.5h；I/R組左肺門過阻斷帶后阻斷肺門缺血0.5 h,松開阻斷帶再灌注2 h；IPC組于缺血前給予連續(xù)的缺血5min/再灌注5min預(yù)處理循環(huán)3次,其余處理同I/R組；IPO組在再灌注前給予連續(xù)的缺血30sec/再灌注30sec后處理循環(huán)3次,余同I/R組。
　　 2.實驗結(jié)束頸動脈取血檢測血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(M

3、DA)含量、髓過氧化物酶(MPO)活性；取肺組織測濕/干重比(W/D)；采用原位末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測肺組織凋亡指數(shù)(AI)；免疫組織化學(xué)、RT-PCR法測定肺組織Bcl-2、Bax蛋白及mRNA的表達(dá)；光鏡、電鏡觀察肺組織形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)變化,并測定肺損傷組織學(xué)定量評價指標(biāo)(IQA)。
　　 結(jié)果:
　　 1.與C組比較,I/R組血清SOD活性顯著降低；MDA含量、MPO活力顯著升高(P均<0.01),IPC組、IPO

4、組與I/R組相比,MDA含量、MPO活力顯著降低,SOD活性升高(P<0.05或P<0.01),IPC組與IPO組比較三者均無明顯差異(P均>0.05)。
　　 2.與C組比較,I/R組肺組織W/D、IQA值顯著升高(P均<0.01),IPC組、IPO組與I/R組相比,肺組織W/D、IQA值顯著降低(P均<0.01),IPC組與IPO組相比,W/D、IQA值無明顯差異(P均>0.05)。
　　 3.肺組織原位細(xì)胞凋亡檢測

5、示I/R組凋亡指數(shù)顯著高于C組,IPC組、IPO組AI顯著低于I/R組(P均<0.01),IPC組與IPO組相比無明顯差異(P>0.05)。凋亡細(xì)胞主要為肺泡上皮細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞。
　　 4.免疫組化檢測各組肺組織Bcl-2、Bax蛋白表達(dá),在C組表達(dá)不明顯,I/R組表達(dá)較C組明顯上調(diào),同時Bcl-2/Bax的比值降低(P均<0.01)；與I/R組比較,IPC組、IPO組Bcl-2蛋白表達(dá)增強,Bax表達(dá)減弱,Bcl-2/Ba

6、x的比值增高(P<0.05或P<0.01),IPC組與IPO組相比無明顯差異(P>0.05)。陽性細(xì)胞主要分布于血管內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞及支氣管上皮細(xì)胞。
　　 5.RT-PCR檢測肺組織Bcl-2、Bax mRNA顯示:在C組表達(dá)不明顯,I/R組表達(dá)較C組明顯上調(diào),同時Bcl-2/Bax的比值降低(P均<0.01)；與I/R組比較,IPC組、IPO組Bcl-2 mRNA表達(dá)增強,Bax mRNA表達(dá)減弱,Bcl-2/Bax的

7、比值增高(P均<0.01),IPC組與IPO組相比無明顯差異(P>0.051。
　　 6.光鏡檢查:C組肺間質(zhì)及肺泡結(jié)構(gòu)保持完整,無明顯受損,未見明顯炎性細(xì)胞；I/R組可見肺間質(zhì)增寬水腫,炎癥細(xì)胞浸潤,肺泡內(nèi)可見較多紅細(xì)胞滲出,損傷明顯；IPC組與I/R組比較,可見肺間質(zhì)水腫減輕,毛細(xì)血管輕度擴(kuò)張、充血,肺泡內(nèi)紅細(xì)胞滲出減少,炎癥細(xì)胞浸潤減少；IPO組肺間質(zhì)水腫程度減輕,炎癥細(xì)胞浸潤減少,肺泡內(nèi)紅細(xì)胞滲出減少,肺泡較完整。

8、>　　 7.透射電鏡檢查:C組毛細(xì)血管,肺泡Ⅰ型,Ⅱ型上皮結(jié)構(gòu)正常；I/R組肺內(nèi)毛細(xì)血管腔內(nèi)炎癥細(xì)胞作用,肺泡腔中有大量滲出,巨噬細(xì)胞活躍,Ⅰ型肺泡上皮細(xì)胞,吞飲小泡減少,Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞胞質(zhì)水腫,核膜增粗?jǐn)U張,板層小體減少、顏色變淡并大量脫落到肺泡腔內(nèi),線粒體腫脹,細(xì)胞核固縮,肺泡膈間質(zhì)有水腫:IPC組肺組織損傷明顯減輕,毛細(xì)血管和肺泡結(jié)構(gòu)均有所改善,血管內(nèi)皮細(xì)胞剝落減少,細(xì)胞核比較疏松,肺泡腔內(nèi)滲出減少,巨噬細(xì)胞活躍,Ⅰ型肺泡上皮

9、細(xì)胞水腫減輕,吞飲小泡增加,Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞板層小體增加,稍有水腫；IPO組肺組織損傷明顯減輕,毛細(xì)血管和肺泡結(jié)構(gòu)均有所改善,血管內(nèi)皮腫脹減輕,核染色質(zhì)趨均勻分布,肺泡腔內(nèi)滲出減少,巨噬細(xì)胞不活躍,Ⅰ型肺泡上皮細(xì)胞吞飲小泡增加,Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞表面微絨毛增多,胞質(zhì)中板層小體增加,但有少量空泡,肺泡隔仍較正常厚,尚有輕度水腫。
　　 結(jié)論:
　　 1.細(xì)胞凋亡可能在肺缺血/再灌注損傷中起重要作用。
　　 2.給予缺