擬南芥和油菜花藥特異表達啟動子的克隆與功能分析.pdf

1、本文通過分析已發(fā)表的相關擬南芥轉錄組文章，挑選了8個擬南芥花藥特異表達基因，結合https://www.arabidopsis.org/上公布的基因組序列設計引物克隆其啟動子區(qū)，并構建啟動子驅動報告基因表達載體，轉化擬南芥。根據(jù)擬南芥啟動子GUS染色結果，選擇PSG6pro和PSG8pro做為花粉特異表達啟動子，通過同源序列比對獲得了其對應的油菜啟動子，構建了3個油菜啟動子驅動報告基因的表達載體，轉化擬南芥，并對克隆的油菜啟動子進行5'

2、端缺失分析，取得的主要結果如下:
　　1.挑選了PSG1、PSG2、PSG3、PSG4、PSG5、PSG6、PSG7、PSG8基因做為花藥特異表達的候選基因，RT-PCR驗證各個基因在擬南芥各器官的表達情況，發(fā)現(xiàn)PSG7在各個組織中均有表達，其余7個基因均只在花蕾，開放的花或角果中有表達。
　　2.克隆挑選的8個基因的啟動子區(qū)，分別其構建啟動子驅動報告基因的表達載體，轉化擬南芥，對擬南芥陽性苗的根、莖、葉、角果、花序進行GU

3、S染色，驗證啟動子的表達情況。結果表明8個啟動子均只在花中特異表達，其中PSG6pro，PSG8pro表達時期較晚，特異性較高。
　　3.將PSG6，PSG8基因的CDS序列與油菜基因組數(shù)據(jù)庫進行比對，分別克隆PSG6在油菜中的一個同源基因和PSG8在油菜中的兩個同源基因的啟動子區(qū)，構建啟動子表達載體，轉化擬南芥，進行GUS染色，染色結果表明這三個啟動子均為花藥特異表達啟動子。
　　4.對3個油菜基因啟動子進行5'端缺失分析