擬南芥和油菜花藥特異表達(dá)啟動(dòng)子的克隆與功能分析.pdf

1、本文通過分析已發(fā)表的相關(guān)擬南芥轉(zhuǎn)錄組文章，挑選了8個(gè)擬南芥花藥特異表達(dá)基因，結(jié)合https://www.arabidopsis.org/上公布的基因組序列設(shè)計(jì)引物克隆其啟動(dòng)子區(qū)，并構(gòu)建啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)報(bào)告基因表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化擬南芥。根據(jù)擬南芥啟動(dòng)子GUS染色結(jié)果，選擇PSG6pro和PSG8pro做為花粉特異表達(dá)啟動(dòng)子，通過同源序列比對(duì)獲得了其對(duì)應(yīng)的油菜啟動(dòng)子，構(gòu)建了3個(gè)油菜啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)報(bào)告基因的表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化擬南芥，并對(duì)克隆的油菜啟動(dòng)子進(jìn)行5'

2、端缺失分析，取得的主要結(jié)果如下:
　　1.挑選了PSG1、PSG2、PSG3、PSG4、PSG5、PSG6、PSG7、PSG8基因做為花藥特異表達(dá)的候選基因，RT-PCR驗(yàn)證各個(gè)基因在擬南芥各器官的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)PSG7在各個(gè)組織中均有表達(dá)，其余7個(gè)基因均只在花蕾，開放的花或角果中有表達(dá)。
　　2.克隆挑選的8個(gè)基因的啟動(dòng)子區(qū)，分別其構(gòu)建啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)報(bào)告基因的表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化擬南芥，對(duì)擬南芥陽性苗的根、莖、葉、角果、花序進(jìn)行GU

3、S染色，驗(yàn)證啟動(dòng)子的表達(dá)情況。結(jié)果表明8個(gè)啟動(dòng)子均只在花中特異表達(dá)，其中PSG6pro，PSG8pro表達(dá)時(shí)期較晚，特異性較高。
　　3.將PSG6，PSG8基因的CDS序列與油菜基因組數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對(duì)，分別克隆PSG6在油菜中的一個(gè)同源基因和PSG8在油菜中的兩個(gè)同源基因的啟動(dòng)子區(qū)，構(gòu)建啟動(dòng)子表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化擬南芥，進(jìn)行GUS染色，染色結(jié)果表明這三個(gè)啟動(dòng)子均為花藥特異表達(dá)啟動(dòng)子。
　　4.對(duì)3個(gè)油菜基因啟動(dòng)子進(jìn)行5'端缺失分析