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1、高爾基體磷酸蛋白2(GOLPH2,GP73)是的一個(gè)功能未知的高爾基體二型跨膜蛋白,定位在高爾基體順面,并能夠通過細(xì)胞內(nèi)膜系統(tǒng)轉(zhuǎn)運(yùn)分泌到細(xì)胞外基質(zhì)。臨床和病理研究表明,GOLPH2與疾病關(guān)系密切,尤其在肝炎肝癌和肝炎患者中發(fā)現(xiàn)有GOLPH2異常高表達(dá),并且能夠分泌到血液,從而可能作為臨床診斷肝癌的血清學(xué)標(biāo)志物。目前關(guān)于GOLPH2 異常表達(dá)的研究主要集中在臨床研究方面,而針對(duì)GOLPH2在肝炎和肝損傷中異常表達(dá)的細(xì)胞和分子機(jī)制研究較少,
2、這限制了GOLPH2在臨床上的應(yīng)用和價(jià)值。
本研究主要應(yīng)用動(dòng)物和細(xì)胞模型,研究GOLPH2在肝炎和肝損傷過程中異常表達(dá)的過程和部分機(jī)制,并初步探討了GOLPH2異常表達(dá)的意義。應(yīng)用肝炎動(dòng)物模型和肝損傷動(dòng)物模型,可以跟蹤肝炎和肝損傷的發(fā)生和進(jìn)展過程。研究發(fā)現(xiàn)GOLPH2 對(duì)肝炎和肝損傷的反應(yīng)非常迅速和靈敏,肝臟受到LPS 或者CCl4 刺激后24h 內(nèi),GOLPH2表達(dá)水平就迅速升高,并在損傷后48h,達(dá)到高峰;同時(shí)肝炎以及
3、肝損傷修復(fù)進(jìn)入尾聲時(shí),GOLPH2 水平緩慢下降,GOLPH2 水平的下降可能還與愈后相關(guān)。GOLPH2 在肝臟炎癥反應(yīng)中的異常表達(dá)可能是炎癥因子(細(xì)胞因子)的調(diào)節(jié)結(jié)果,使用細(xì)胞因子體外刺激小鼠原代肝細(xì)胞以及肝癌細(xì)胞系Hep3B 細(xì)胞,檢測(cè)GOLPH2表達(dá)。結(jié)果顯示IL-1b以及IL-6 有上調(diào)GOLPH2的作用,而TGF-b能夠顯著下調(diào)肝細(xì)胞GOLPH2表達(dá)水平;沒有檢測(cè)到TNF-a以及IFN-r 對(duì)GOLPH2的調(diào)節(jié)效果。這部分研究
4、結(jié)果表明GOLPH2 可能與肝炎過程中免疫細(xì)胞分泌的IL-1b、IL-6表達(dá)水平升高相關(guān)。為了進(jìn)一步研究GOLPH2 在肝炎中表達(dá)是否存在生理意義,我們第一次構(gòu)建和使用了GOLPH2基因敲除鼠模型,使用Cre-Loxp系統(tǒng)敲除GOLPH2基因外顯子5,結(jié)果顯示GOLPH2 存在一種尚未發(fā)現(xiàn)的新的可變剪接方式,外顯子6的5'端存在2個(gè)剪接位點(diǎn),使得GOLPH2 可以選擇兩個(gè)不同的位置連接外顯子6,屬于可變剪接中的可變3'端剪接方式。由于事
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