高爾基體膜蛋白73蛋白質(zhì)的表達(dá)及其在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用.pdf

1、我國是肝癌大國，目前最常用的肝癌篩查指標(biāo)是血清中甲胎蛋白(AFP)水平，然而其敏感性不高，北京協(xié)和醫(yī)院的肝細(xì)胞癌患者的AFP敏感性僅為45.8％(>200ng/ml)。近年來，美國一組科學(xué)家發(fā)現(xiàn)高爾基體蛋白73(GP73)有可能成為更好的診斷肝癌尤其是早期肝癌的血清標(biāo)志物。我們的初步研究提示GP73診斷臨床肝癌的敏感性和特異性分別高達(dá)77％和93％，可以作為肝癌早期診斷的標(biāo)志物。但GP73在肝癌的發(fā)生和發(fā)展中的作用需要闡明。 為

2、了制備臨床大規(guī)模檢測GP73所需的抗體診斷試劑盒，我們首先要表達(dá)GP73抗原。本實驗第一部分首先將GP73 cDNA分成N端和C端進行擴增，并將這兩段目的基因連接到原核表達(dá)載體pET29a+中，成功構(gòu)建了兩種原核表達(dá)載體pET29a+-GP73 N和pET29a+-GP73 C重組質(zhì)粒，并將其轉(zhuǎn)化到原核表達(dá)大腸桿菌Rosetta(DE3)中獲得GP73-N/C重組工程菌。轉(zhuǎn)化菌株經(jīng)誘導(dǎo)后表達(dá)GP73-N端和C端蛋白，目前經(jīng)親和層析純化后

3、正在注入小鼠和雞體內(nèi)用于制備單克隆和多克隆抗體，從而為臨床常規(guī)檢測GP73奠定了基礎(chǔ)。 為了探討GP73和肝癌發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系，本實驗第二部分首先擴增了人GP73基因，連接到逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pLXIN-hyg中，成功構(gòu)建了pLXIN-Hyg-GP73重組質(zhì)粒，將其轉(zhuǎn)染病毒包裝細(xì)胞PT67，然后在低表達(dá)GP73的肝癌細(xì)胞系HepG2中，通過穩(wěn)定病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)使之過量表達(dá)GP73，通過細(xì)胞計數(shù)發(fā)現(xiàn)GP73有促進細(xì)胞增殖的能力，提示GP