利用高通量技術(shù)手段研究急性髓系白血病中常見(jiàn)融合蛋白AML1-ETO的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制.pdf

1、由染色體易位形成的融合蛋白是白血病發(fā)生的重要原因之一，因此融合蛋白在白血病發(fā)病中的作用一直是重要的研究方向，然而對(duì)于融合蛋白所累及的野生型蛋白在相關(guān)白血病發(fā)病中所起的作用人們卻知之甚少。近年來(lái)的一些研究提示融合蛋白所影響的野生型蛋白可能在白血病的發(fā)生和維持中也起一定的作用。本研究以異常融合蛋白AML1-ETO與正常髓系分化的重要轉(zhuǎn)錄因子AML1為研究對(duì)象，分別通過(guò)研究?jī)烧咴谌蚪M水平結(jié)合的關(guān)系以及對(duì)下游靶基因的調(diào)控方面來(lái)闡述異常融合蛋

2、白及其累及的正常轉(zhuǎn)錄因子在急性髓系白血病發(fā)病中的作用。
　　我們利用高通量的染色質(zhì)免疫共沉淀-測(cè)序列技術(shù)（Chromatin Immunoprecipitation-Sequencing,ChIP-seq）獲得了t（8；21）病人細(xì)胞系Kasumi-1中AML1-ETO和AML1在全基因組上的靶位點(diǎn)數(shù)據(jù)。ChIP-seq數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示兩者的結(jié)合位點(diǎn)存在很大程度的重合，并且AML1-ETO和AML1之間通過(guò)各自的RHD（Runt

3、homology domain）結(jié)構(gòu)域存在直接相互作用。對(duì)兩者共結(jié)合的位點(diǎn)的分析表明，部分位點(diǎn)上AML1-ETO的信號(hào)明顯高于AML1，部分位點(diǎn)上AML1-ETO的信號(hào)明顯低于AML1。進(jìn)一步對(duì)這兩部分位點(diǎn)進(jìn)行motif分析，結(jié)果表明AML1信號(hào)高的位點(diǎn)主要富集出經(jīng)典的AML1 motif(AAACCACA)，而AML1-ETO信號(hào)高的位點(diǎn)主要富集出變異的AML1 motif(ACCACAG)。最后結(jié)合轉(zhuǎn)錄組的RNA-seq數(shù)據(jù)，我們發(fā)

4、現(xiàn)AML1-ETO對(duì)基因的激活與較高的AML1結(jié)合信號(hào)相關(guān)，而AML1-ETO對(duì)基因的抑制則與較高的AML1-ETO結(jié)合信號(hào)相關(guān)。同時(shí)AML1-ETO可能通過(guò)與AML1以及AP-1，ERG形成復(fù)合物激活下游靶基因的表達(dá)，它們可能通過(guò)與PU.1以及E-box形成復(fù)合物抑制下游靶基因的表達(dá)。這些結(jié)果在全基因組水平上證明了AML1-ETO與AML1在不同靶基因上形成的不同的結(jié)合平衡狀態(tài)以及對(duì)不同轉(zhuǎn)錄因子的募集與其對(duì)下游靶基因的調(diào)控密切相關(guān)。這