中國漢族人群ADAM10啟動子區(qū)基因多態(tài)性與膿毒癥易感性及其下游底物、相關(guān)促炎癥因子的關(guān)聯(lián)性研究.pdf

1、[目的]
　　1.揭示中國漢族人群中ADAM10啟動子區(qū)基因多態(tài)性(rs514049，rs653765)與膿毒癥發(fā)病風(fēng)險的關(guān)聯(lián)性。
　　2.闡明ADAM10啟動子區(qū)基因多態(tài)性與膿毒癥、重癥膿毒癥、膿毒癥休克不同分組的關(guān)聯(lián)性。
　　3.探討ADAM10啟動子區(qū)基因多態(tài)性與ADAM10 mRNA表達量的相關(guān)性。
　　4.弄清ADAM10啟動子區(qū)基因多態(tài)性與其脫落底物CX3CL1、IL-6R及TNF-α，相關(guān)促炎癥因子

2、IL-1β及IL-6表達量的相關(guān)性。
　　[方法]
　　采用病例-對照的研究方法，分別對中國南方湛江地區(qū)273例膿毒癥病例、280例健康志愿者，中國北方哈爾濱地區(qū)167例膿毒癥病例、170例健康志愿者進行基因型檢測分析。根據(jù)國際規(guī)定的膿毒癥分型方法，將病例組分為三個亞組，即一般膿毒癥組、重癥膿毒癥及膿毒癥休克組;根據(jù)28天死亡率，將病例組分為存活組與死亡組，進一步分析ADAM10啟動子區(qū)兩個基因多態(tài)位點(rs514049，r

3、s653765)基因多態(tài)性與膿毒癥及各亞組間的關(guān)聯(lián)性。分別隨機抽取76例膿毒癥病例和84例健康志愿者標(biāo)本，采取RT-PCR法檢測外周血單核細胞ADAM10 mRNA的表達量;采取ELISA法檢測外周血單核細胞中CX3CL1、IL-6R、TNF-α、IL-1β及IL-6表達量;采用雙熒光素酶法檢測ADAM10啟動子單體型的活性，最終分析ADAM10啟動子區(qū)基因多態(tài)性與ADAM10 mRNA，CX3CL1，IL-6R，TNF-α，IL-1β

4、及IL-6的表達水平的關(guān)系。
　　[結(jié)果]
　　1.病例組和對照組中ADAM10基因rs514049、rs653765多態(tài)性位點的基因型頻率的分布規(guī)律符合Hardy-Weinberg遺傳平衡(P＞0.05，數(shù)據(jù)未顯示)。此外，功效分析顯示，就此樣本量而言，rs653765有90.1％的功效，而rs514049有64.3％的功效，能夠檢測基因型的相對風(fēng)險（OR=1.5）。
　　2.ADAM10 rs653765與rs51

5、4049多態(tài)性位點的基因型頻率在膿毒癥及健康對照組無明顯統(tǒng)計學(xué)差異（各基因型、等位基因頻率分布均P＞0.05），提示ADAM10 SNPs位點與膿毒癥發(fā)病風(fēng)險無明顯關(guān)系。另外，ADAM10 rs653765基因多態(tài)性與膿毒癥28天死亡率無明顯關(guān)聯(lián)(均P＞0.05)。
　　3.ADAM10 rs653765多態(tài)性位點的基因型及等位基因頻率在重癥膿毒癥病例、重癥膿毒癥/膿毒癥休克病例與膿毒癥病例比較中存在顯著性差異。根據(jù)顯性模型(CC

6、與CT/TT比較)，重癥膿毒癥或重癥膿毒癥/膿毒癥休克病例與膿毒癥病例相比存在統(tǒng)計學(xué)差異(分別P1=0.0014，P3=0.0037)，經(jīng)Benjamini-Hochberg(BH)多重檢驗校正后，此統(tǒng)計學(xué)差異仍存在（分別P1=0.0014，P3=0.0037）;另外，重癥膿毒癥及重癥膿毒癥/膿毒癥休克病例G等位基因的頻率明顯高于膿毒癥病例(分別P1=0.0008，P3=0.0023)，經(jīng)Benjamini-Hochberg(BH)多重

7、檢驗校正后，此統(tǒng)計學(xué)差異仍存在（分別P1=0.0014，P3=0.0037），提示ADAM10 rs653765基因多態(tài)性與膿毒癥發(fā)展風(fēng)險相關(guān)。然而ADAM10 rs514049多態(tài)性位點的基因型和等位基因的頻率分布在膿毒癥病例組和健康對照組，膿毒癥各亞組間均無顯著性差異（P＞0.05）。
　　4.在重癥膿毒癥組中，帶有rs653765 CC基因型的患者ADAM10 mRNA的表達量比對照組明顯升高(P＜0.05);攜帶rs653

8、765 CC基因型患者伴隨外周血單核細胞中CX3CL1、IL-6R及TNF-α的表達量比對照組升高（均P＜0.05）。
　　5.雙熒光素酶法檢測發(fā)現(xiàn)在THP-1中ADAM10 C-A啟動子單體型熒光素酶活性比T-A、T-C單體型明顯增強（均P＜0.01）。
　　[結(jié)論]
　　1.在中國漢族人群中，ADAM10 rs653765基因多態(tài)性位點與重癥膿毒癥發(fā)展風(fēng)險顯著相關(guān)。
　　2.在重癥膿毒癥患者中，ADAM10