聯(lián)合應(yīng)用督脈電針與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療大鼠全橫斷脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本研究旨在探討督脈電針能否促進(jìn)脊髓全橫斷損傷處移植的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)的存活、分化和遷移，以及聯(lián)合應(yīng)用督脈電針與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植能否更好地促進(jìn)大鼠脊髓受損傷的軸突再生和改善其后肢的活動(dòng)功能，并分析其中可能的作用機(jī)制，為臨床上治療急性脊髓損傷提供新的治療策略和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本研究分為以下二部分： (一)、電針督脈不同穴位對(duì)脊髓損傷處移植的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞遷移的影響 目的：探討電針不同督脈穴位對(duì)脊髓全橫斷損傷處移植

2、的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞遷移的影響。 方法：將成年SD大鼠分為MSCs移植組，督脈電針(百會(huì)穴GV20，大椎穴GV14，至陽(yáng)穴GV9，脊中穴GV6)+MSCs移植組，督脈電針(至陽(yáng)穴，脊中穴，腰俞穴GV2，長(zhǎng)強(qiáng)穴GV1)+MSCs移植組。選取幼年雄性SD大鼠股骨全骨髓細(xì)胞，采用全骨髓培養(yǎng)法進(jìn)行體外培養(yǎng)，通過(guò)不斷傳代對(duì)MSCs進(jìn)行純化，取第3代細(xì)胞備用。上述3組大鼠脊髓T10段全橫斷手術(shù)后，在損傷處植入Hoechst33342標(biāo)記的MS

3、Cs。接受督脈電針的兩組大鼠于術(shù)后7d，分別接受電針治療。所有實(shí)驗(yàn)大鼠于術(shù)后30d取材，熒光顯微鏡下分別測(cè)量各組大鼠脊髓損傷處移植的MSCs向損傷處頭端和尾端組織遷移的距離。 結(jié)果：督脈電針(百會(huì)穴，大椎穴，至陽(yáng)穴，脊中穴)+MSCs移植組，MSCs向脊髓損傷區(qū)頭端組織遷移的距離明顯長(zhǎng)于MSCs移植組；督脈電針(至陽(yáng)穴，脊中穴，腰俞穴，長(zhǎng)強(qiáng)穴)+MSCs移植組，MSCs向脊髓損傷區(qū)尾端組織遷移的距離明顯長(zhǎng)于MSCs移植組。

4、 結(jié)論：督脈電針能夠促進(jìn)脊髓全橫斷損傷處移植的MSCs的遷移；電針不同督脈穴位對(duì)脊髓損傷處移植的MSCs的遷移有一定的影響。 (二)、聯(lián)合應(yīng)用督脈電針與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療大鼠全橫斷脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究 目的：探討督脈電針能否促進(jìn)脊髓全橫損傷處移植的MSCs存活和分化，以及聯(lián)合應(yīng)用督脈電針與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植能否更好地促進(jìn)大鼠脊髓受損傷軸突的再生和改善其后肢的活動(dòng)功能。 方法：將成年SD大鼠分為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組、

5、MSCs移植組、督脈電針組、督脈電針+MSCs移植組。建立大鼠全橫斷脊髓損傷的動(dòng)物模型，需要進(jìn)行細(xì)胞移植組的大鼠在脊髓全橫斷后立即向脊髓橫斷處移植MSCs，需要接受督脈電針治療組的大鼠在術(shù)后一周給予督脈電針(選取至陽(yáng)穴，脊中穴，腰俞穴，長(zhǎng)強(qiáng)穴4個(gè)穴位)治療，隔天一次，至術(shù)后30d。每周進(jìn)行BBB評(píng)分和爬網(wǎng)格測(cè)試。術(shù)后14d，取大鼠脊髓橫斷處及前后節(jié)段脊髓檢測(cè)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素-3(NT-3)的分泌量。術(shù)后30d，進(jìn)行灌注、取材，然后切片并進(jìn)行免

6、疫熒光組織化學(xué)染色等形態(tài)學(xué)檢測(cè)。 結(jié)果：術(shù)后30d，在移植MSCs的兩組大鼠中，我們都能觀察到MSCs在脊髓損傷處的存活和分化，兩組相比，脊髓損傷處移植的MSCs的存活數(shù)目沒(méi)有差異。與MSCs移植組相比，督脈電針+MSCs移植組的MSCs分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞及少突膠質(zhì)樣細(xì)胞的百分率明顯增高。與其它實(shí)驗(yàn)組相比，督脈電針+MSCs移植組的大鼠脊髓損傷處及其頭、尾側(cè)脊髓節(jié)段NT-3水平最高，其次為督脈電針組。與其它實(shí)驗(yàn)組相比，在督脈電針

7、+MSCs移植組的大鼠脊髓損傷處及其鄰近組織中，神經(jīng)絲蛋白-200(NF-200)、5-羥色胺(5-HT)和降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)陽(yáng)性神經(jīng)纖維數(shù)量明顯增多；髓鞘堿性蛋白(MBP)陽(yáng)性髓鞘結(jié)構(gòu)較為明顯；此外，大腦皮質(zhì)體感運(yùn)動(dòng)區(qū)內(nèi)錐體細(xì)胞層、中腦紅核和L1脊髓背核的受損傷神經(jīng)元存活數(shù)量明顯增高；癱瘓后肢后BBB評(píng)分值最高。 結(jié)論：督脈電針能夠促進(jìn)大鼠脊髓損傷處及其鄰近組織分泌NT-3和促進(jìn)移植的MSCs分化為神經(jīng)元樣細(xì)