積雪草酸對(duì)心肌缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的:通過體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)探討積雪草酸（Asiatic acid，AA）對(duì)心肌缺血再灌注的保護(hù)作用及其機(jī)制
　　方法:本文通過體外培養(yǎng)原代乳大鼠心肌細(xì)胞，結(jié)合厭氧袋與氧糖剝奪相結(jié)合(OGD)的方法模擬心肌細(xì)胞缺血-再灌住(I-R)損傷來觀察AA對(duì)心肌細(xì)胞氧化損傷及心肌細(xì)胞凋亡的作用;體內(nèi)通過結(jié)扎小鼠左前降支來建立I-R模型，觀察AA對(duì)缺血再灌注損傷的心肌組織的保護(hù)作用，并探討相關(guān)作用機(jī)制。具體方法如下:
　　1.細(xì)胞模型的建立

2、:
　　原代培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞，采用氧糖剝奪及厭氧袋相結(jié)合法，利用DMEM(無糖)替代DMEM(高糖)，厭氧袋模擬缺氧環(huán)境，缺氧6h，再灌住12h制備心肌細(xì)胞I-R模型。觀察AA(20 umol/l)預(yù)處理對(duì)心肌細(xì)胞缺血再灌注損傷的作用。測(cè)定指標(biāo)如下:熒光顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)ROS熒光強(qiáng)度和心肌細(xì)胞線粒體膜電位，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡。Western Blot法檢測(cè)心肌細(xì)胞MAPK信號(hào)激酶(p38，ERK1/2以及JNK)和線粒體凋亡相

3、關(guān)蛋白(Caspase-9，Caspase-3，Cyto-chrome c， Bcl-2以及Bax)的表達(dá)。
　　2.動(dòng)物模型的建立
　　C57B6雄性小鼠，術(shù)前AA或相應(yīng)安慰劑預(yù)處理7天，加藥組每天灌胃AA100mg/kg，后常規(guī)建立小鼠MI/R(30 min/6 h)模型。觀察AA預(yù)處理對(duì)心肌缺血再灌注損傷的作用。測(cè)定指標(biāo)如下:應(yīng)用小動(dòng)物彩色多普勒超聲儀檢測(cè)AA小鼠心臟血流動(dòng)力學(xué)變化，解剖顯微鏡下拍照并用Image J面

4、積測(cè)算軟件計(jì)算心肌梗死面積，熒光顯微鏡觀察組織ROS熒光強(qiáng)度，TUNEL原位標(biāo)記法檢測(cè)心肌組織中細(xì)胞凋亡，Western Blot法檢測(cè)心肌細(xì)胞MAPK信號(hào)激酶(p38，ERK1/2以及JNK)和線粒體凋亡相關(guān)蛋白(Caspase-9，Caspase-3，Cyto-chromec，Bcl-2以及Bax)的表達(dá)。
　　結(jié)果:在體實(shí)驗(yàn)顯示缺血再灌注后小鼠心臟功能降低、心肌梗死面積增大，AA預(yù)處理能夠增加小鼠的LVEF和％FS水平，提高

5、心臟功能，并能夠降低心肌梗死面積，體外實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的I-R模型均能夠誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡，并且心肌細(xì)胞內(nèi)ROS水平顯著升高，線粒體膜電位顯著降低，心肌細(xì)胞內(nèi)Cleavedcaspase-9，-3以及Cyto-chrome c蛋白表達(dá)顯著增加，Bax/Bcl-2比例升高，p38、ERK1/2、JNK磷酸化水平增加。AA預(yù)處理可以顯著降低心肌細(xì)胞凋亡率，降低心肌細(xì)胞內(nèi)ROS水平，升高線粒體膜電位，降低Cleaved caspase-9，-3和