miR-192和miR-204轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控HOTTIP影響肝細(xì)胞癌的生長.pdf

1、肝細(xì)胞癌是世界上死亡率最高的癌癥之一，長鏈非編碼RNA HOTTIP是肝細(xì)胞癌的一個重要的原癌基因。然而，由HOTTIP的異常表達(dá)對HOTTIP在轉(zhuǎn)錄后水平和下游分子事件的調(diào)控作用仍未曾研究過。
　　首先我們預(yù)測了靶向HOTTIP的miRNA，通過實時定量PCR確定了miR-192和miR-204可以在肝細(xì)胞癌細(xì)胞系HepG2和SMMC7721中抑制HOTTIP的表達(dá)。miR-192和miR-204在許多癌癥中都發(fā)揮著抑癌作用，在

2、目前的研究中，我們確定了在肝細(xì)胞癌中miR-192和miR-204可通過AGO2介導(dǎo)的RNA干涉途徑抑制HOTTIP的表達(dá)。通過雙熒光素酶報告基因?qū)嶒炦M(jìn)一步確定miR-192和miR-204與HOTTIP之間的作用。同樣，在肝細(xì)胞癌組織中也發(fā)現(xiàn)這兩種miR-192和miR-204與HOTTIP存在負(fù)相關(guān)的關(guān)系。有趣的是，這三種非編碼RNA的異常調(diào)節(jié)與肝細(xì)胞癌病人的總生存時間有關(guān)。此外，miR-192、miR-204或HOTTIP siR

3、NA轉(zhuǎn)錄后可以沉默HOTTIP進(jìn)而抑制肝細(xì)胞癌細(xì)胞的生長。內(nèi)源性抑制miR-192和miR-204可使HOTTIP表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)細(xì)胞生長。通過轉(zhuǎn)錄組測序我們確定了除靶基因HOXA13外的19個基因，如谷氨酰胺基因，為miR-192/-204-HOTTIP的下游靶基因。谷氨酰胺是癌細(xì)胞的一個重要的標(biāo)志物，我們檢測到miR-192/204-HOTTIP可抑制谷氨酰胺的表達(dá)中斷肝細(xì)胞癌的谷氨酰胺代謝，阻礙細(xì)胞生長。實驗結(jié)果表明miR-192/