MiR-204在高血壓腎損傷中的作用.pdf

1、本研究分為二部分：
　　第一部分、建立高血壓腎損傷模型及檢測(cè)miR-204表達(dá)
　　目的：檢測(cè)miR-204在大鼠不同組織的表達(dá)，誘導(dǎo)大鼠高血壓，檢測(cè)腎損傷及miR-204的表達(dá)變化
　　方法：將SS大鼠隨機(jī)分為兩組：一組給予高鹽飲食（4％NaCl），為SS高鹽組（SS HS）；另一組給予低鹽飲食（0.4%NaCl），為SS對(duì)照組(SS LS)。同時(shí)也將SS13BN大鼠隨機(jī)分為兩組，一組給予高鹽飲食（4%NaCl），為

2、SS13BN高鹽組(SS13BN HS)；另一組給予低鹽飲食（0.4%NaCl），為SS13BN對(duì)照組(SS13BN LS)。Telemetry測(cè)壓法（遙控測(cè)壓法）通過(guò)頸動(dòng)脈監(jiān)測(cè)血壓。測(cè)壓兩周后收集24小時(shí)尿液，檢測(cè)微量白蛋白及肌酐。通過(guò)PCR檢測(cè)大鼠不同器官及各組大鼠腎臟miR-204的表達(dá)，并進(jìn)行比較。
　　結(jié)果： SS對(duì)照組與SS13BN對(duì)照組的血壓維持在正常水平，SS高鹽組與SS13BN高鹽組的血壓與對(duì)照組相比均升高（P<

3、0.01），且SS高鹽組血壓比SS13BN高鹽組更高（P<0.01）。SS對(duì)照組與SS13BN對(duì)照組的24小時(shí)尿微量白蛋白(Alb)及白蛋白肌酐比(Alb/Cr)維持在正常水平，SS高鹽組與SS13BN高鹽組的Alb及Alb/Cr較對(duì)照組顯著增高（P<0.05），且SS高鹽組Alb與Alb/Cr均高于SS13BN高鹽組（P<0.05）。熒光定量PCR測(cè)得SS對(duì)照組及SS13BN對(duì)照組大鼠組織中，miR-204在腎臟的表達(dá)高于心臟與肝臟，

4、且腎臟皮質(zhì)的miR-204表達(dá)量比髓質(zhì)高。SS高鹽組與SS13BN高鹽組的miR-204在腎臟皮質(zhì)的表達(dá)與對(duì)照組相比明顯降低，而SS高鹽組miR-204的表達(dá)量較SS13BN高鹽組更低。
　　結(jié)論：高鹽飲食可引起SS大鼠及SS13BN大鼠血壓升高，并導(dǎo)致高血壓腎損傷。SS大鼠在高鹽飲食誘導(dǎo)下血壓升高幅度更大，腎損傷更為嚴(yán)重。MiR-204在腎臟的表達(dá)量高于其他器官。MiR-204在高鹽誘導(dǎo)的大鼠高血壓腎損傷的表達(dá)下降，與人類高血壓

5、腎硬化miR-204表達(dá)改變相一致。SS高鹽組miR-204表達(dá)量更高提示miR-204的表達(dá)改變與高血壓腎損傷的嚴(yán)重程度相關(guān)。
　　第二部分、miR204在大鼠高血壓腎損傷中的作用及可能的機(jī)制
　　目的：研究miR-204對(duì)高鹽誘導(dǎo)的大鼠高血壓腎損傷的影響及潛在的作用機(jī)制。
　　方法：將SS13BN大鼠隨機(jī)分為兩組，一組通過(guò)腹腔注射anti-miR204將miR-204敲低，即敲低組(anti-miR204 grou

6、p)，另一組腹腔注射anti-scramble,為對(duì)照組（anti-scramble group）。利用高鹽飲食(4%NaCl)誘導(dǎo)大鼠高血壓及腎損傷，Telemetry測(cè)壓法（遙控測(cè)壓法）通過(guò)頸動(dòng)脈監(jiān)測(cè)血壓，階段性收集24小時(shí)尿液，用于檢測(cè)Na,K,微量白蛋白，尿總蛋白及肌酐。實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)miR-204在腎臟皮質(zhì)的表達(dá)。HE及三色馬松染色觀察并分析比較兩組腎臟病理?yè)p傷。PCR法檢測(cè)膠原纖維-1(Col1a)，纖維連接蛋白（Fn

7、1）及轉(zhuǎn)化生子因子-b1(TGFb1)等腎臟纖維化及損傷基因表達(dá)。進(jìn)一步通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR及western-blot蛋白印跡法檢測(cè)miR-204靶基因及通路蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：給予高鹽飲食后，兩組大鼠血壓均輕度升高。敲低組腎皮質(zhì)miR204經(jīng)PCR驗(yàn)證表達(dá)顯著降低（P<0.01）。高鹽飲食一周及兩周時(shí)的24小時(shí)尿微量白蛋白及白蛋白肌酐比較基線時(shí)顯著增高（P<0.05），且高鹽飲食2周后敲低組Alb與Alb/Cr均高于對(duì)照組,但

8、差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩組腎臟病理顯示不同程度的損傷，敲低組的小葉間動(dòng)脈中層與內(nèi)徑的比值明顯高于對(duì)照組（P<0.05），實(shí)驗(yàn)組的蛋白管型比對(duì)照組多，但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，實(shí)驗(yàn)組皮質(zhì)纖維化面積比對(duì)照組明顯增多（P<0.05）。PCR結(jié)果顯示敲低組Col1a1，Col1a3，F(xiàn)n1，TGFb1等表達(dá)均升高（P<0.05）。敲低組SHP2及STAT3的表達(dá)均升高。
　　結(jié)論：高鹽飲食可引起SS13BN大鼠血壓輕度升高并導(dǎo)致高血壓腎損傷。腹