大鼠腎小管上皮細胞缺氧-復氧模型的建立.pdf

1、目的：建立一種新的大鼠腎小管上皮細胞NRK-52E缺氧/復氧模型，為下一步實驗選擇合適的缺氧/復氧時間點。 方法：本實驗使用大鼠NRK-52E細胞。實驗分為對照組及實驗組，實驗組分為缺氧2、4和6 h及缺氧后復氧1、12和24h組。缺氧時換用缺氧液，再置入N294％+O21％+CO25％缺氧環(huán)境；缺氧后換用含10％胎牛血清的DMEM/F12，置入空氣95％+CO25％有氧環(huán)境，制作缺氧/復氧模型；臺盼藍攝取法進行細胞計數(shù)及檢測細

2、胞存活率，分光光度法檢測培養(yǎng)基中的乳酸脫氫酶(LDH)含量，用流式細胞術(Anncxin-V/PI雙標記)及TUNEL法檢測細胞凋亡。 結(jié)果： 1、臺盤藍活細胞計數(shù)大鼠腎小管上皮細胞經(jīng)過缺氧/復氧處理后，與對照組比較，臺盼藍攝取率顯著提高，細胞存活率顯著下降；實驗組中，復氧后細胞存活率較復氧前明顯降低，在R12到達最低值，隨之逐漸升高，但是在R24時仍較復氧前降低。 2、LDH檢測大鼠腎小管上皮細胞經(jīng)過缺氧/復氧

3、處理后，LDH含量升高。實驗組中，復氧后LDH值較復氧前明顯升高，在R12到達最高值，隨之逐漸降低，但是在R24時仍較復氧前高。 3、流式細胞儀檢測細胞凋亡大鼠腎小管上皮細胞經(jīng)過缺氧/復氧處理后，與對照組比較，同時被Armexin V-FITC和碘化丙啶染色的細胞明顯增多，H4/R12細胞凋亡比率最大為21.7％。 4、TUNEL法檢測大鼠腎小管上皮細胞經(jīng)過缺氧/復氧處理后，與對照組比較，TUNNEL陽性細胞明顯增加。H