高脂飲食對低密度脂蛋白受體基因敲除(LDLR---)小鼠骨密度和骨微結(jié)構(gòu)的影響及其機(jī)制初步研究.pdf

1、第一部分高脂飲食對低密度脂蛋白受體基因敲除(LDLR-/-)小鼠血脂水平的影響
　　目的：觀察高脂飲食對LDLR-/-小鼠血脂水平的影響
　　方法：選取11周齡LDLR-/-雄性小鼠和同性別、同周齡野生型C57BL/6J(WT)小鼠各13只，普通飲食適應(yīng)性喂養(yǎng)至12周(基線)后每組各處死3只小鼠，余下的每組小鼠隨機(jī)分為普通飲食組和高脂飲食組(普通飲食+10％豬油+2.5%膽固醇+0.5%膽酸鈉)，包括WT普通飲食組、WT高脂

2、飲食組、LDLR-/-普通飲食組、LDLR-/-高脂飲食組，40周處死全部小鼠。測定血脂指標(biāo)，包括甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)。選用2×2析因設(shè)計方差分析研究基因(LDLR-/-與WT)、飲食(高脂飲食與普通飲食)及基因×飲食交互作用(LDLR-/-小鼠高脂飲食)對小鼠血脂水平的影響。當(dāng)兩因素有交互作用時，固定其中一個因素并結(jié)合另一個因素不同水平上進(jìn)行兩兩比較。<

3、br>　　結(jié)果：
　　1.12周基線水平：與WT小鼠相比，LDLR-/-小鼠TC、LDL-C水平增高(P<0.05)，TG、HDL-C水平未見明顯變化(P>0.05)；
　　2.鼠齡增長至40周：
　　(1)LDLR-/-與高脂飲食對TG(P<0.05)、TC、LDL-C(P<0.01)水平增高存在交互作用，對HDL-C水平則無明顯影響(P>0.05)。
　　(2)高脂飲食引起WT小鼠TC增高(P<0.05)，而

4、TG和LDL-C水平無明顯變化(P>0.05)；高脂飲食也可引起LDLR-/-小鼠TG(P<0.05)、TC、LDL-C(P<0.01)增高。
　　(3)普通飲食條件下，LDLR-/-小鼠較WT小鼠其TG(P<0.05)、TC、LDL-C(P<0.01)水平增高；高脂飲食條件下，LDLR-/-小鼠較WT小鼠其TG、TC、LDL-C(P<0.01)水平增高。
　　結(jié)論：
　　1.LDLR-/-小鼠基線水平血脂紊亂，提示L

5、DLR-/-影響血脂代謝；
　　2.鼠齡達(dá)40周后：LDLR-/-和高脂飲食均可引起小鼠血脂紊亂；LDLR-/-和高脂飲食對血脂代謝具有交互作用，提示LDLR-/-可在高脂飲食誘導(dǎo)下進(jìn)一步影響血脂代謝；
　　第二部分高脂飲食對低密度脂蛋白受體基因敲除(LDLR-/-)小鼠骨鈣含量、骨密度、骨微結(jié)構(gòu)影響及其可能機(jī)制的初步
　　研究目的：觀察高脂飲食對LDLR-/-小鼠骨鈣含量、骨密度、骨微結(jié)構(gòu)影響和可能發(fā)生機(jī)制。

6、　　方法：選取11周齡LDLR-/-雄性小鼠和同性別、同周齡野生型C57BL/6J(WT)小鼠各13只，普通飲食適應(yīng)性喂養(yǎng)至12周(基線)后每組各處死3只小鼠，余下的每組小鼠隨機(jī)分為普通飲食組和高脂飲食組(標(biāo)準(zhǔn)飲食+10%豬油+2.5%膽固醇+0.5%膽酸鈉)，包括WT普通飲食組、WT高脂飲食組、LDLR-/-普通飲食組、LDLR-/-高脂飲食組，40周處死全部小鼠。應(yīng)用原子吸收分光光度計測定股骨骨鈣含量。應(yīng)用顯微CT(micro CT

7、)測定各組小鼠左側(cè)脛骨骨微結(jié)構(gòu)參數(shù)，包括：組織骨密度(tBMD)，結(jié)構(gòu)模型指數(shù)(SMD，骨小梁聯(lián)接密度(Conn.D)，骨體積分?jǐn)?shù)(BV/TV)，骨面積密度(BS/BV)，骨小梁數(shù)量(Tb.N)，骨小梁厚度(Tb.Th)，骨小梁間隔(Tb.Sp)，各向異性度(DA)，三維成像后定量分析比較。快速取出右側(cè)脛骨，提取總RNA，采用實時定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)檢測骨保護(hù)素(OPG)mRNA及核因子kappa B受體活化因子配體(RANKL)mRN

8、A表達(dá)水平，計算OPG/RANKL mRNA比值。選用2×2析因設(shè)計方差分析研究基因(LDLR-/-與WT)、飲食(高脂飲食與普通飲食)及基因×飲食交互作用(LDLR-/-小鼠高脂飲食組)對小鼠不同時期骨鈣含量、骨密度、骨微結(jié)構(gòu)和OPG/RANKL mRNA比值的影響。當(dāng)兩因素有交互作用時，固定其中一個因素并結(jié)合另一個因素不同水平上進(jìn)行兩兩比較。
　　結(jié)果：
　　1.12周基線水平：與WT小鼠相比，LDLR-/-小鼠骨鈣含量

9、未見明顯變化(P>0.05)，tBMD、BV/TV、Tb.N、Conn.D下降(P<0.01)，BS/BV、Tb.Sp增高(P<0.05)，Tb.Th、Tb.Th、DA無明顯變化(P>0.05)，OPG/RANKL mRNA比值明顯降低(P<0.01)；
　　2.鼠齡增長至40周：
　　(1)LDLR-/-與高脂飲食對小鼠骨鈣含量、tBMD、BV/TV(P<0.05)、Tb.N、Tb.Th(P<0.01)，SMI(P<0.0

10、1)、Tb.Sp及OPG/RANKL mRNA水平(P<0.05)的改變具有交互作用。
　　(2)高脂飲食對WT小鼠骨鈣含量、骨量和骨微結(jié)構(gòu)參數(shù)及OPG/RANKL mRNA水平均無明顯變化(P>0.05)；高脂飲食引起LDLR-/-小鼠骨鈣含量降低(P<0.01)、tBMD(P<0.05)、Tb.N、OPG/RANKL mRNA比值降低(P<0.01)，Tb.Sp增高(P<0.05)，而Tb.Th、BV/TV、SMI無明顯變化(

11、P>0.05)。
　　(3)普通飲食條件下，LDLR-/-小鼠較WT小鼠其骨鈣含量、tBMD、OPG/RANKL mRNA比值(P<0.01)降低，Tb.Sp增高(P<0.05)，Tb.N、Tb.Th、BV/TV、SMI無明顯變化(P>0.05)；高脂飲食條件下，LDLR-/-小鼠較WT小鼠其骨鈣含量、tBMD、Tb.N、OPG/RANKL mRNA比值(P<0.01)、Tb.Th、BV/TV(P<0.05)降低，SMI、Tb.S

12、p增高(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.LDLR-/-小鼠基線水平骨量下降、骨微結(jié)構(gòu)受損；
　　2.鼠齡達(dá)40周后：
　　(1)高脂飲食僅能引起LDLR-/-小鼠骨量下降、骨微結(jié)構(gòu)退化；
　　(2)無論何種飲食，LDLR-/-均可引起小鼠骨量下降、骨微結(jié)構(gòu)退化；
　　(3)LDLR-/-和高脂飲食對小鼠骨鈣含量、骨密度、骨微結(jié)構(gòu)具有交互作用；LDLR-/-高脂飲食組骨量下降、骨微結(jié)構(gòu)退化、OPG