雌激素膜受體GPR30對新生大鼠心肌細胞肥大和升主動脈縮窄心肌肥厚的影響及其機制的實驗性研究.pdf

1、研究背景:心肌肥厚（LVH）是導(dǎo)致高血壓病患者心血管事件發(fā)生率明顯升高的獨立危險因素，其發(fā)生機制復(fù)雜，目前尚不十分清楚，因此也缺乏有效的防治措施。但心肌細胞肥大的病理學(xué)基礎(chǔ)已經(jīng)明確，即由收縮表型的心肌細胞向合成表型轉(zhuǎn)變的過程。肥大的心肌耗氧量增加、收縮性下降、電生理性能發(fā)生改變，最終導(dǎo)致心肌缺血、心力衰竭和心律失常發(fā)生的危險性明顯增加。因此如何預(yù)防和逆轉(zhuǎn)心肌細胞肥大及心肌肥厚已經(jīng)成為當今醫(yī)學(xué)探討的熱點和難點課題之一。臨床研究已經(jīng)表明絕經(jīng)

2、后婦女其心血管病發(fā)生率明顯增加，說明雌激素在心血管疾病的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著不可替代的作用。早在20世紀90年代就有人用實驗的方法證明了雌激素可抑制甚至逆轉(zhuǎn)大鼠心肌肥厚的發(fā)生，同時臨床資料也報道了雌激素治療可有效抑制或延緩患者左心室肥厚的發(fā)生。過去人們認為雌激素通過與經(jīng)典的雌激素核受體結(jié)合，啟動相關(guān)的基因效應(yīng)，激活其下游一系列的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白而發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)作用?？墒呛髞砜茖W(xué)家們研究發(fā)現(xiàn)，在雌激素核受體（ERα和ERβ）均被敲除的動物體

3、內(nèi)，注射雌激素后也能產(chǎn)生一些快速的雌激素效應(yīng)，如舒張血管、胞內(nèi)電生理的改變等，暗示著雌激素受體除了經(jīng)典的雌激素核受體外，還存在著另一類的雌激素受體，能產(chǎn)生一些快速的膜效應(yīng)。后來經(jīng)過大量的研究表明這類雌激素受體定位于細胞膜上，屬于G蛋白偶聯(lián)受體家族成員，取名為GPR30（Gproteinreceptor30）。由于其可發(fā)揮快速雌激素效應(yīng)，故成為科研界青睞的研究對象。目前已經(jīng)證明GPR30可抑制雌激素相關(guān)腫瘤的發(fā)生與發(fā)展，同時GPR30在心

4、血管方面的研究也有了相應(yīng)的成果，主要體現(xiàn)在GPR30可降低血壓、心肌缺血-再灌注損傷中的保護作用，但是關(guān)于GPR30是否產(chǎn)生雌激素核受體相同的抑制心肌肥厚的發(fā)生，目前尚無相關(guān)報道。本課題觀察GPR30對培養(yǎng)的新生Sprague-Dawley（SD）大鼠心肌細胞肥大及壓力超負荷誘導(dǎo)的LVH的影響，研究GPR30逆轉(zhuǎn)心肌細胞肥大及LVH的可能性，初步探討MAPK/ERK途徑在GPR30調(diào)控心肌細胞肥大中的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)作用，旨在闡明GPR30對大

5、鼠心肌肥厚的影響及分子生物學(xué)機制，為高血壓LVH防治提供新的理論依據(jù)和治療思路。
　　研究方法:本研究以培養(yǎng)的新生SD大鼠心肌細胞和主動脈縮窄術(shù)（TAC）所致成年SD大鼠心肌肥厚為模型，采用免疫熒光染色、HE染色、蛋白免疫印跡（Westernblot）等技術(shù)，觀察：①GPR30在心肌細胞的半定量和定位分析；②GPR30對NE誘導(dǎo)的心肌細胞肥大的影響；③GPR30對心肌肥厚的影響；④GPR30對信號蛋白MAPK/ERK的影響。

6、>　　研究結(jié)果:①免疫熒光染色顯示GPR30在心肌細胞膜上大量表達；②10-4M濃度的NE干預(yù)24h后，心肌細胞表面積（1647.21±155.65μ㎡），顯著高于空白對照組（560.24±109.55μ㎡），并有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；不同濃度GPR30特異性激動劑G-1和NE共同干預(yù)，隨著G-1濃度的增加，心肌細胞表面積呈遞減趨勢，其中10pM、100pM、1nM和10nMG-1濃度其心肌細胞表面積分別為1433.27±153.

7、35μ㎡，1076.88±199.28μ㎡，898.74±187.58μ㎡，1167.34±177.46μ㎡，均明顯低于NE組（P<0.01）；③MTT結(jié)果顯示，NE可明顯誘導(dǎo)心肌細胞的損傷（P<0.01），且G-1對NE誘導(dǎo)的心肌細胞損傷具有明顯的保護作用（P<0.01）；④WesternBlot檢測結(jié)果顯示與損傷組或造模組進行比較，G-1可明顯抑制促凋亡蛋白Caspase3的表達，促進抗凋亡蛋白Bcl2的表達，抑制ERK的磷酸化水平