GPR30激活對去卵巢大鼠心肌細胞缺血-再灌注損傷保護作用的研究.pdf

1、目的：本實驗通過在細胞水平建立缺血/再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)損傷模型，研究用G蛋白偶聯(lián)雌激素受體(GPR30)特異性激動劑G1激活GPR30對去卵巢大鼠心肌細胞I/R損傷的保護作用，并進一步研究這種保護作用與β2-腎上腺素受體(β2-adrenergic receptor，β2-AR)及其下游PI3K(phosphoinositide3-kinase，PI3 K)/Akt信號通路的關系。
　　方法

2、：成年雌性SD大鼠隨機分為兩組：假手術(Sham)組和雙側卵巢切除術(Ovx)組。術后四周：首先，酶解法分離Ovx組大鼠心肌細胞，用11nM G1分別預處理15min，30min，60min后，行缺氧3h復氧4h模擬I/R損傷，測定復氧末心肌細胞的桿狀率和培養(yǎng)基中LDH的釋放量以確定G1的最佳作用時間；其次，酶解法分離Sham和Ovx組大鼠心肌細胞，并分成：①Sham組：Sham組心肌細胞正常培養(yǎng)；②Ovx組：Ovx組心肌細胞正常培養(yǎng)；

3、③Ovx+E2組：Ovx組心肌細胞用1nM17β-雌二醇預處理24小時；④Ovx+G1組：Ovx組心肌細胞用11nM G1預處理最佳作用時間，行缺氧3h復氧4h模擬I/R損傷，測定復氧末心肌細胞收縮功能、凋亡率；最后，①②④組心肌細胞分別加入β2-AR拮抗劑ICI118，551(55nM)孵育1h和PI3K/Akt拮抗劑LY294002(50μM)孵育1h，行缺氧3h復氧4h模擬I/R損傷，測定復氧末心肌細胞收縮功能。
　　結果：

4、1.I/R明顯增加培養(yǎng)基中LDH的釋放量(P<0.01)，減少心肌細胞的桿狀率(P<0.01)。Ovx+I/R組與Sham+I/R組相比，LDH的釋放量進一步增加(P<0.01)，桿狀率進一步降低(P<0.01)。與G1預處理15分鐘和60分鐘相比，用G1預處理30分鐘，LDH釋放量最低，心肌細胞桿狀率最高，且與Sham+I/R組相比無統(tǒng)計學差異。
　　2.與Sham組比，Ovx組大鼠心肌細胞收縮幅度增加(P<0.05)，收縮時間

5、(TPP)延長(P<0.05)，舒張時間(R90)縮短(P<0.05)，加重了心肌損傷，Ovx+E2組和Ovx+G1組都減低了心肌細胞收縮幅度，縮短了TPP，延長了R90，兩組無統(tǒng)計學差異。
　　3.與Sham組相比，Ovx組凋亡率明顯升高(P<0.05)，與Ovx組相比，Ovx+G1組凋亡率降低(P<0.05)，Ovx+E2組凋亡率降低(P<0.05)，Ovx+G1組與Ovx+E2組無統(tǒng)計學差異。
　　4.與Sham組相比

6、，Ovx組明顯增加大鼠心肌細胞的收縮幅度(P<0.01)，延長TPP(P<0.01)，縮短R90(P<0.01)，用G1激活GPR30使其恢復至Sham組水平。使用β2-AR拮抗劑ICI118，551后，ICI118，551處理組與其對照組相比，Sham組和Ovx+G1組收縮幅度增加(P<0.01)，TPP延長(P<0.01)，R90縮短(P<0.01)，但Ovx組沒有此作用。
　　5.與Sham組相比，Ovx組明顯增加大鼠心肌細

7、胞的收縮幅度(P<0.01)，延長TPP(P<0.01)，縮短R90(P<0.01)，用G1激活GPR30使其恢復至Sham組水平。使用PI3K/Akt特異性阻斷劑LY294002后，LY294002處理組與其對照組相比，Sham組、Ovx組和Ovx+G1組均收縮幅度增加，TPP延長，R90縮短。
　　結論：1.在細胞水平，用特異性激動劑G1激活GPR30可改善I/R損傷的去卵巢大鼠心肌細胞收縮功能，降低心肌細胞凋亡率。