公共環(huán)境中葡萄球菌對(duì)季銨鹽類消毒劑的抗性研究.pdf

1、目的:檢測(cè)公共消毒環(huán)境分離的葡萄球菌對(duì)季銨鹽類化合物的抗藥性、相關(guān)抗性基因的定位和耐藥的轉(zhuǎn)移及其影響因素,為有效控制細(xì)菌對(duì)消毒劑耐藥性的發(fā)展提供一定科學(xué)研究基礎(chǔ),為消毒劑的合理使用提供新的科學(xué)依據(jù)。
　　 方法:收集醫(yī)院公共消毒環(huán)境中分離的葡萄球菌共26株,采用瓊脂稀釋測(cè)定MIC的方法對(duì)其耐藥性和對(duì)消毒劑的適應(yīng)性進(jìn)行考察。應(yīng)用PCR基因擴(kuò)增試驗(yàn)檢測(cè)葡萄球菌中耐季銨鹽的qacA/B,smr,qacG,qacH和qacE△1基因水平

2、。然后提取和消除耐藥菌株的質(zhì)粒,確定基因是否位于質(zhì)粒上。最后進(jìn)行耐藥質(zhì)粒在葡萄球菌和大腸埃希菌之間的接合轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn),并考察不同供受體比例,交配時(shí)間下接合轉(zhuǎn)移率的不同,以及亞抑菌濃度季銨鹽作用和作用時(shí)間對(duì)接合轉(zhuǎn)移率的影響。
　　 結(jié)果:在調(diào)查的26株葡萄球菌中已經(jīng)有15株對(duì)季銨鹽產(chǎn)生了較高的抵抗力,最小抑菌濃度值高于48μg/ml。絕大多數(shù)葡萄球菌經(jīng)過適應(yīng)性的培養(yǎng)后,最小抑菌濃度都有不同程度的增長(zhǎng)。其中S1的MIC值更是從141μg

3、/ml上升到48μg/ml。但有10株增長(zhǎng)后仍不超過26μg/ml。其余初始最小抑菌濃度值不低于48μg/ml的菌株除812培養(yǎng)后最小抑菌濃度仍為50μg/ml外,都高于70μg/ml。其中9株攜帶qacA/B基因,1株攜帶smr。qacG,qacH和qacE△1均未檢出。提取質(zhì)粒后的結(jié)果中,我們發(fā)現(xiàn)提取到質(zhì)粒的九株葡萄球菌剛好是被檢出含有qacA/B耐藥基因的菌株,含有qacA/B耐藥基因的菌株都攜帶有質(zhì)粒。質(zhì)粒消除后,葡萄球菌對(duì)季銨

4、鹽的耐藥性大幅下降。質(zhì)?？梢栽谄咸亚蚓痛竽c埃希菌細(xì)菌之間進(jìn)行轉(zhuǎn)移。質(zhì)粒從葡萄球菌到大腸埃希菌的濾膜接合轉(zhuǎn)移中,最佳的供受體比例為3:1,最佳的交配時(shí)間為32h,添加亞抑菌濃度的季銨鹽可以大大提高轉(zhuǎn)移率,且最佳的濃度為4μg/ml,而接合轉(zhuǎn)移率隨著亞抑菌濃度季銨鹽作用時(shí)間的增加而增加。
　　 結(jié)論:醫(yī)院消毒環(huán)境中葡萄球菌對(duì)季銨鹽的耐藥率高,攜帶了qacA/B耐藥基因的菌株,均表現(xiàn)出對(duì)季銨鹽的抵抗性。qacA/B耐藥基因位于質(zhì)粒上