人CD59活性位點短肽封條的抗腫瘤效應(yīng)的研究.pdf

1、目的 本研究旨在通過噬菌體展示技術(shù)尋找與腫瘤逃逸相關(guān)的CD59活性位點，研制特異性針對CD59活性位點的短肽封條，觀測其封閉或干擾效應(yīng)，為腫瘤的靶向免疫治療開辟一條新途徑。 方法 采用噬菌體隨機十二肽庫展示技術(shù)對Hela細(xì)胞裂解蛋白及層析純化后的CHO細(xì)胞的裂解蛋白進行5輪親和淘洗篩選；從篩選后的噬菌體庫中分別隨機挑選15/16個噬菌體克隆進行測序，并對隨機挑選的噬菌體克隆與野生型M13噬菌體進行競爭結(jié)合實驗；經(jīng)

2、序列分析找出共享序列并推斷其相應(yīng)的氨基酸位點，同時與CD59活性區(qū)域進行分析比對，找出人CD59分子的活性位點，并合成短肽封條，觀測其封閉效應(yīng)。 結(jié)果 經(jīng)過5輪全細(xì)胞篩選后，兩種噬菌體庫的回收量均可達(dá)到10<'7>～10<'8>數(shù)量級，且競爭結(jié)合分析及細(xì)胞特異性結(jié)合分析顯示篩選后的噬菌體克隆及噬菌體庫對兩種細(xì)胞蛋白均具有明顯的特異性結(jié)合效應(yīng)。通過測序結(jié)果推斷出Hela細(xì)胞表面CD59的多肽序列(-ACHWPWCHGC-)