噬菌體肽庫展示技術在腫瘤逃逸相關CD59基因活性位點的篩選及構建中的應用研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：利用噬菌體隨機十二肽庫篩選出能夠和人CD59及其單克隆抗體分別特異性結合的短肽序列，找出與人CD59分子特異結合的配體肽蛋白質及分析這些蛋白質的同源序列，設計具有拮抗人CD59腫瘤逃逸活性的短肽封條，為研究通過封閉人CD59腫瘤逃逸位點以提高腫瘤靶向藥物的生物學療效奠定理論基礎。 方法：用噬菌體隨機十二肽庫對體外培養(yǎng)的高表達人CD59的中國倉鼠卵巢細胞(CHO)和人CD59單克隆抗體進行篩選，并分別隨機挑選篩選后的噬菌體單

2、克隆進行測序，并進行與野生型噬菌體的競爭結合實驗。在測序結果中找出并分析出現頻率高的短肽序列以設計短肽封條，利用透射電鏡和免疫組織化學技術觀察該封條對人CD59在腫瘤細胞凋亡方面的作用的影響。 結果：經過篩選后，各部分噬菌體庫的回收量均達到較高的數量級和明顯的結合特異性。測序結果顯示3個序列均與已公布的(PubMed)人CD2的氨基酸序列有一定的同源性(H×A××××××P××)。電鏡和免疫組化實驗顯示，據此設計的短肽封條可顯著

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