噬菌體肽庫(kù)展示技術(shù)在腫瘤逃逸相關(guān)CD59基因活性位點(diǎn)的篩選及構(gòu)建中的應(yīng)用研究.pdf

1、目的：利用噬菌體隨機(jī)十二肽庫(kù)篩選出能夠和人CD59及其單克隆抗體分別特異性結(jié)合的短肽序列，找出與人CD59分子特異結(jié)合的配體肽蛋白質(zhì)及分析這些蛋白質(zhì)的同源序列，設(shè)計(jì)具有拮抗人CD59腫瘤逃逸活性的短肽封條，為研究通過封閉人CD59腫瘤逃逸位點(diǎn)以提高腫瘤靶向藥物的生物學(xué)療效奠定理論基礎(chǔ)。 方法：用噬菌體隨機(jī)十二肽庫(kù)對(duì)體外培養(yǎng)的高表達(dá)人CD59的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO)和人CD59單克隆抗體進(jìn)行篩選，并分別隨機(jī)挑選篩選后的噬菌體單

2、克隆進(jìn)行測(cè)序，并進(jìn)行與野生型噬菌體的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)。在測(cè)序結(jié)果中找出并分析出現(xiàn)頻率高的短肽序列以設(shè)計(jì)短肽封條，利用透射電鏡和免疫組織化學(xué)技術(shù)觀察該封條對(duì)人CD59在腫瘤細(xì)胞凋亡方面的作用的影響。 結(jié)果：經(jīng)過篩選后，各部分噬菌體庫(kù)的回收量均達(dá)到較高的數(shù)量級(jí)和明顯的結(jié)合特異性。測(cè)序結(jié)果顯示3個(gè)序列均與已公布的(PubMed)人CD2的氨基酸序列有一定的同源性(H×A××××××P××)。電鏡和免疫組化實(shí)驗(yàn)顯示，據(jù)此設(shè)計(jì)的短肽封條可顯著