沙利度胺及其結(jié)構(gòu)類似物調(diào)控CRBN及cullin4RING-CRBNE3泛素連接酶的機制研究.pdf

1、研究背景和目的：
　　免疫調(diào)節(jié)藥物（Immunomodulatory drugs，IMiDs)沙利度胺(Thalidomide,Thai)及其結(jié)構(gòu)類似物來那度胺（Lenalidomide，Len)和泊馬度胺(Pomalidomide Po m)IG cereblon(CRBN),并抑制CRBN的泛素化。近年來的研究主要集中在這些藥物對CRBN底物的泛素化。然而沙利度胺對E3泛素連接酶活性的影響還不清楚。本課題擬研究沙利度胺及其類似

2、物抑制CRBN泛素化的意義及其對cullin4A RING-CRBN E3泛素連接酶活性的影響，以更清楚地掲示來那度胺治療多發(fā)性骨髓瘤的分子機制,為新藥研發(fā)提供新的靶點。
　　研究方法：
　　用沙利度胺及其類似物處理過表達CRBN的HEK293T細胞，純化CRBN蛋白后用免疫印跡檢測藥物對CRBN泛素化的影響。用藥物處理多發(fā)性骨髓瘤細胞，免疫印跡實驗檢測內(nèi)源性CRBN蛋白及其相互作用蛋白BKCa的表達水平。過表達GFP與CR

3、BN,流式細胞儀檢測過表達CRBN后多發(fā)性骨髓瘤細胞對藥物的敏感性。
　　研究結(jié)果：
　　(1)沙利度胺及其類似物抑制人與鼠源CRBN蛋白的泛素化。
　　(2)沙利度胺與來那度胺不破壞CRL4-CRBNE3泛素連接酶復合物的組成。
　　(3)沙利度胺抑制CRBN蛋白上K48位多聚泛素鏈的形成，進而抑制CRBN的泛素-蛋白酶體途徑降解，引起CRBN的積累。
　　(4)CRBN的上調(diào)增強了CRL4-CRBNE3

4、的活性，促進了其對底物蛋白的泛素化及降解。
　　(5)CRBN蛋白的表達水平與多發(fā)性骨髓瘤細胞對泊馬度胺的敏感性有關(guān)。
　　(6)CRBN相關(guān)E3的底物蛋白IKZF1和IKZF3的表達水平也與多發(fā)性骨髓瘤細胞對泊馬度胺的敏感性相關(guān)。
　　研究結(jié)論：
　　沙利度胺及其結(jié)構(gòu)類似物能夠上調(diào)CRBN的蛋白水平，CRBN的增加增強了CRL4-CRBNE3泛素連接酶的活性，促進了底物蛋白的降解，增強了骨髓瘤細胞對藥物的敏感性