大鼠腦外傷后自噬-溶酶體途徑相關(guān)蛋白表達(dá)的研究.pdf

1、目的：研究自噬/溶酶體途徑在腦外傷后激活情況，并對(duì)其在神經(jīng)損傷修復(fù)中的作用進(jìn)行探討。 方法：采用自由落體法建立大鼠腦外傷(traumatic brain injury,TBI)模型，透射電鏡法觀測(cè)損傷區(qū)及其周邊區(qū)(皮層與海馬)神經(jīng)元中自噬體的形成情況，免疫組化及免疫印記法檢測(cè)損傷區(qū)及其周邊區(qū)(皮層與海馬)自噬/溶酶體途徑相關(guān)蛋白catheosin-B、cathepsin-D、LC3以及Beclinl的表達(dá)。免疫熒光雙標(biāo)及激光共聚

2、焦法檢測(cè)損傷區(qū)及其周邊區(qū)(皮層與海馬)cathepsin-B、cathepsin-D、LC3以及Beclinl陽(yáng)性細(xì)胞與caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞的共表達(dá)情況。 結(jié)果：透射電鏡顯示大鼠腦外傷后1h即見(jiàn)到損傷及周邊區(qū)神經(jīng)元內(nèi)自噬體形成，4d-8d出現(xiàn)最為明顯，一直持續(xù)到32d。免疫印記及免疫組化結(jié)果顯示，腦外傷后1hcathepsin-B表達(dá)增加(P<0.05)，8d達(dá)高峰，32d仍有較多表達(dá)(P<0.05)；腦外傷后12h ca

3、thepsin-D表達(dá)增加(P<0.05)，8d達(dá)高峰，32d仍有較多表達(dá)(P<0.05)；腦外傷后1h LC3、Beclinl表達(dá)增加(P<0.05)，均于8d達(dá)高峰，32d仍有較多表達(dá)(P<0.05)。免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示，腦外傷初期，cathepsin-B和-D陽(yáng)性細(xì)胞與caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞重疊較少，腦外傷后6h開(kāi)始增加，32d仍然有很多陽(yáng)性細(xì)胞重疊；腦外傷初期，LC3和Beclinl陽(yáng)性細(xì)胞與caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞重疊

4、較少，腦外傷后24h開(kāi)始增加，32d仍然有較多陽(yáng)性細(xì)胞重疊。 結(jié)論：1．大鼠腦外傷后自噬被激活。2．大鼠腦外傷后溶酶體酶激活。其激活在腦外傷早期可能抑制細(xì)胞凋亡執(zhí)行因子caspase-3的激活，之后(6h后)則與caspase-3起協(xié)同作用，共同促進(jìn)細(xì)胞死亡。3．在腦外傷后修復(fù)過(guò)程中，自噬對(duì)一些神經(jīng)細(xì)胞起持續(xù)性保護(hù)作用，這種作用在腦外傷初期尤為明顯；在腦外傷中晚期則可能參與促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞死亡過(guò)程。4．自噬和凋亡促進(jìn)了溶酶體酶的活化