自噬在伊馬替尼誘導(dǎo)胃腸道間質(zhì)瘤耐藥過程中作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　自噬在腫瘤耐藥中扮演著雙重角色，可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;但也可以通過減緩腫瘤細(xì)胞對放、化療的反應(yīng)，導(dǎo)致耐藥。前期通過Agilent人microRNA寡核苷酸基因芯片V3，檢測耐藥前后microRNA表達(dá)的差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-320a差異顯著。已知miR-320a在某些肝細(xì)胞癌、結(jié)腸癌及泌尿系統(tǒng)腫瘤中表達(dá)，并與藥物的敏感性相關(guān)。而且，自噬相關(guān)基因Atg14是miR-320a的靶基因。然而miR-320a在伊馬替尼誘導(dǎo)GIST

2、s耐藥過程中的作用尚無報道。自噬與GISTs相關(guān)的研究也非常少，故希望通過研究miR-320a與自噬的調(diào)節(jié)關(guān)系，探究其在GISTs耐藥過程中的作用。
　　方法：
　　首先觀察伊馬替尼敏感及耐藥組織中形態(tài)學(xué)差異;通過生物學(xué)信息庫預(yù)測miR-320a的靶基因及其可能通路基因，并通過免疫組織化學(xué)法檢測伊馬替尼敏感及耐藥組織中相關(guān)蛋白的表達(dá)差異。其次，建立人GISTs細(xì)胞耐藥株GIST882R，并對GISTs882進(jìn)行耐藥前后的細(xì)胞

3、增殖檢測、劃痕實驗、細(xì)胞毒性實驗等生物功能學(xué)實驗確認(rèn)耐藥株建立成功。并且通過MDC染色法檢測自噬小體形成，通過qRT-PCR檢測耐藥前后GISTs882細(xì)胞株miR-320a表達(dá)情況及下游相關(guān)基因表達(dá)水平變化;通過免疫細(xì)胞化學(xué)和Western Blotting檢測miR-320a下游靶基因編碼蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　我們發(fā)現(xiàn)，耐藥GISTs組織較敏感組織在細(xì)胞形態(tài)由梭型變成上皮型或混合型，核分裂相明顯增多(P＜0.05

4、)，侵襲性增強(qiáng)。臨床標(biāo)本組織芯片免疫組化染色發(fā)現(xiàn):與敏感組織相較，在耐藥組織中AKT、mTOR、AT(G14的蛋白表達(dá)升高，而BCL-2蛋白表達(dá)降低。在GISTs細(xì)胞系中，耐藥后的GISTs細(xì)胞株形態(tài)發(fā)生變化，遷移能力增強(qiáng)。GIST882R細(xì)胞株自噬體檢測表達(dá)強(qiáng)于GIST882S細(xì)胞株。PCR檢測發(fā)現(xiàn)耐藥株中ATK、mTOR、ATG14基因表達(dá)均上調(diào)，BCL-2基因表達(dá)下調(diào)，免疫細(xì)胞染色和Western Blotting檢測顯示耐藥細(xì)胞