自噬在伊馬替尼誘導胃腸道間質瘤耐藥過程中作用機制的研究.pdf

1、目的：
　　自噬在腫瘤耐藥中扮演著雙重角色，可以誘導細胞凋亡;但也可以通過減緩腫瘤細胞對放、化療的反應，導致耐藥。前期通過Agilent人microRNA寡核苷酸基因芯片V3，檢測耐藥前后microRNA表達的差異，結果發(fā)現miR-320a差異顯著。已知miR-320a在某些肝細胞癌、結腸癌及泌尿系統腫瘤中表達，并與藥物的敏感性相關。而且，自噬相關基因Atg14是miR-320a的靶基因。然而miR-320a在伊馬替尼誘導GIST

2、s耐藥過程中的作用尚無報道。自噬與GISTs相關的研究也非常少，故希望通過研究miR-320a與自噬的調節(jié)關系，探究其在GISTs耐藥過程中的作用。
　　方法：
　　首先觀察伊馬替尼敏感及耐藥組織中形態(tài)學差異;通過生物學信息庫預測miR-320a的靶基因及其可能通路基因，并通過免疫組織化學法檢測伊馬替尼敏感及耐藥組織中相關蛋白的表達差異。其次，建立人GISTs細胞耐藥株GIST882R，并對GISTs882進行耐藥前后的細胞

3、增殖檢測、劃痕實驗、細胞毒性實驗等生物功能學實驗確認耐藥株建立成功。并且通過MDC染色法檢測自噬小體形成，通過qRT-PCR檢測耐藥前后GISTs882細胞株miR-320a表達情況及下游相關基因表達水平變化;通過免疫細胞化學和Western Blotting檢測miR-320a下游靶基因編碼蛋白的表達。
　　結果：
　　我們發(fā)現，耐藥GISTs組織較敏感組織在細胞形態(tài)由梭型變成上皮型或混合型，核分裂相明顯增多(P＜0.05

4、)，侵襲性增強。臨床標本組織芯片免疫組化染色發(fā)現:與敏感組織相較，在耐藥組織中AKT、mTOR、AT(G14的蛋白表達升高，而BCL-2蛋白表達降低。在GISTs細胞系中，耐藥后的GISTs細胞株形態(tài)發(fā)生變化，遷移能力增強。GIST882R細胞株自噬體檢測表達強于GIST882S細胞株。PCR檢測發(fā)現耐藥株中ATK、mTOR、ATG14基因表達均上調，BCL-2基因表達下調，免疫細胞染色和Western Blotting檢測顯示耐藥細胞