CCL3L1基因拷貝數(shù)變異與漢族狼瘡腎炎的關(guān)系及患者的生存分析.pdf

1、引言:
　　 系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemiclupuserythematosus，SLE)是自身免疫性疾病的原型，以體內(nèi)產(chǎn)生多種致病性抗體、累及多系統(tǒng)、多臟器為臨床特征。該病在中國(guó)的患病率在36.03-84.43/10萬(wàn)之間，好發(fā)于育齡期婦女，男女患病率之比約為1∶9，其發(fā)病機(jī)制迄今尚未完全闡明，目前認(rèn)為與遺傳、性激素、感染、環(huán)境等因素相互作用引起機(jī)體免疫調(diào)節(jié)紊亂相關(guān)。狼瘡腎炎(lupusnephritis，LN)是SLE常見(jiàn)

2、的臨床表現(xiàn)，是影響SLE預(yù)后的重要因素之一。近50％的SLE患者在病程早期即出現(xiàn)尿檢異?；蚰I功能異常，80％患者在以后的病程中出現(xiàn)明顯的腎功能異常[1]。10％-20％的LN患者最終發(fā)展成終末期腎臟病[2-4]。由于狼瘡腎炎的臨床表現(xiàn)及預(yù)后在不同種族、不同地區(qū)存在差異，甚至同一種族不同群體之間也存在差異，這種異質(zhì)性可能與多種因素相關(guān)。因此確定本民族、本地區(qū)狼瘡腎炎的臨床特點(diǎn)，了解影響預(yù)后的因素是十分必要的。我們收集河南漢族狼瘡腎炎的臨床

3、資料分析其臨床特征，并進(jìn)行長(zhǎng)期隨訪(fǎng)，了解影響其生存的因素，以便更好指導(dǎo)臨床，使更多的患者受益。
　　 從遺傳學(xué)角度上講，系統(tǒng)性紅斑狼瘡又是一個(gè)多基因病，單核苷酸多態(tài)性（singlenucleotidepolymorphisms，SNPs）和拷貝數(shù)變異(copynumbervariants，CNVs)是人類(lèi)基因變異的兩個(gè)重要遺傳基礎(chǔ)。近幾年對(duì)SLE的基因關(guān)聯(lián)分析研究(genome-wideassociationstudy，GWAS

4、)發(fā)現(xiàn)了許多新的易感基因/位點(diǎn)。但是SNPs對(duì)于SLE這一復(fù)雜性狀疾病來(lái)講，僅能解釋相對(duì)一小部分疾病風(fēng)險(xiǎn)，即使再擴(kuò)大樣本量，遺傳因素如何導(dǎo)致疾病的發(fā)病仍然解釋不清。在SNP-GWAS的熱潮過(guò)后，如何進(jìn)一步挖掘SNP芯片數(shù)據(jù)的剩余價(jià)值是許多研究機(jī)構(gòu)關(guān)心的問(wèn)題，CNV成為研究熱點(diǎn)，基于SNP的全基因組關(guān)聯(lián)研究結(jié)果，選擇具有遺傳風(fēng)險(xiǎn)性的基因進(jìn)行CNV的研究，發(fā)現(xiàn)補(bǔ)體C4(complementcomponent4)、FCGR3B(Fcgamma

5、receptorⅢBgene)、TLR7(toll-likereceptor7)、CCL3L1(CCchemokineligand3-like-1)等基因拷貝數(shù)變異與系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病相關(guān)，但這些研究大都來(lái)自其他種族。目前有關(guān)趨化因子CCL3L1與SLE相關(guān)性研究結(jié)果存在較大差異，并且不同群體之間基因拷貝數(shù)分布也存在差異，中國(guó)人群CCL3L1拷貝數(shù)的分布及是否與SLE相關(guān)尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　 因此，本研究在分析河南漢族狼瘡腎炎流行

6、病學(xué)、臨床病理資料及預(yù)后因素的同時(shí)，應(yīng)用多重基因拷貝數(shù)檢測(cè)的生物學(xué)技術(shù)分析了患者的遺傳信息，探索CCL3L1基因拷貝數(shù)變異與河南漢族狼瘡腎炎及其臨床表型是否存在相關(guān)性，為進(jìn)一步闡明系統(tǒng)性紅斑狼瘡的遺傳發(fā)病機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。
　　 目的:
　　 1.分析河南漢族狼瘡腎炎臨床病理特點(diǎn)、生存率及預(yù)后因素。
　　 2.了解CCL3L1基因拷貝數(shù)在河南狼瘡腎炎及正常人群分布情況;探索CCL3L1基因拷貝數(shù)變異與河南狼瘡腎炎

7、及其臨床表型是否存在相關(guān)性。
　　 方法:
　　 1研究對(duì)象
　　 1.1研究對(duì)象來(lái)自2003年1月～2010年12月間就診于鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院腎病風(fēng)濕科的狼瘡腎炎患者491例，其中男性52例，女性439例，均符合1997年ACR系統(tǒng)性紅斑狼瘡分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)，采集人口學(xué)資料、臨床及病理資料，每3-6月進(jìn)行一次隨訪(fǎng)，終點(diǎn)事件定義為死亡。其中血液標(biāo)本保存完好的LN患者共337例，女性307例，男性30例。
　　

8、1.2健康對(duì)照者來(lái)自鄭州大學(xué)學(xué)生志愿者及鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院體檢中心的健康志愿者，共338例，其中女性309例，男性29例，采集血樣標(biāo)本。年齡性別均與狼瘡腎炎組匹配，所有入選者均來(lái)自河南漢族。
　　 2實(shí)驗(yàn)方法
　　 2.1對(duì)所有臨床病理資料進(jìn)行總結(jié)，建立excel表格，每3-6個(gè)月門(mén)診或者電話(huà)隨診1次，或按病情隨診，終點(diǎn)事件為死亡。記錄患者主要的臨床表現(xiàn)、病情變化、實(shí)驗(yàn)室檢查、治療方案、并發(fā)癥及死亡原因。
　　

9、 2.2用酚-氯仿法提取外周血基因組DNA，采用上海天昊生物科技有限公司開(kāi)發(fā)的AccuCopyTM多重基因拷貝數(shù)檢測(cè)專(zhuān)利技術(shù)，進(jìn)行病例-對(duì)照分析，確定狼瘡腎炎和健康對(duì)照CCL3L1基因拷貝數(shù)變異分布情況及CCL3L1拷貝數(shù)變異對(duì)狼瘡腎炎所貢獻(xiàn)的風(fēng)險(xiǎn)大小。
　　 2.3采用病例-病例對(duì)照研究，進(jìn)一步探索CCL3L1基因拷貝數(shù)變異是否與狼瘡臨床表型具有相關(guān)性。
　　 3統(tǒng)計(jì)分析
　　 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)

10、行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析，定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，定性資料以頻數(shù)（百分比）表示;計(jì)量資料滿(mǎn)足正態(tài)分布用t-test，偏態(tài)分布用Mann-WhitneyTest。定性資料采用卡方檢驗(yàn)和Fisher精確概率法進(jìn)行組間比較;采用Logistic回歸分析狼瘡腎炎的風(fēng)險(xiǎn)因素;采用Kaplan-Meier方法估計(jì)患者的生存率曲線(xiàn)和生存時(shí)間的95％可信區(qū)間(CI)，用Log-rank檢驗(yàn)比較各組生存率差異。多因素分析用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行分析，

11、以確定影響生存率的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素。P＜0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.河南漢族狼瘡腎炎腎臟病理類(lèi)型分布特征:增殖性病理類(lèi)型占比例較大，Ⅳ型最多，共164例(33.4％)，Ⅲ型82例(16.7％)，復(fù)合型Ⅲ+Ⅴ型39例(7.9％)、Ⅳ+Ⅴ型83例(16.9％)，非增殖性狼瘡腎炎占比例相對(duì)較少，Ⅰ型9例(1.8％)，Ⅱ型46(9.4％)，Ⅴ型67例(13.6％)，Ⅵ型最少，僅有1例(0.2％)。
　

12、　 2.生存分析:河南漢族狼瘡腎炎患者1年生存率98.0％，5年生存率88.0％，10年生存率77.0％，15年生存率53.0％，20年生存率45.0％，中位生存時(shí)間為17.3年。
　　 3.COX回歸分析:升高的血清肌酐(HR，2.041;95％CI，1.134-3.672)和大量蛋白尿(HR，1.716;95％CI，1.104-2.666)是影響生存的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素，服用羥氯喹(HR，0.197;95％CI，0.047-0.

13、820)和糖皮質(zhì)激素(HR，0.457;95％CI，0.252-0.828)是獨(dú)立的保護(hù)因素，而其他的臨床指標(biāo)對(duì)生存的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4.死亡原因分析示:死亡47例，18例(38.3％)死于感染，11例(23.4％)死于SLE疾病本身，14例(29.8％)死于心血管疾病，4例(8.5％)死于其他原因。感染是死亡的主要原因，與疾病相關(guān)的死亡多見(jiàn)于發(fā)病的前5年，而心血管事件相關(guān)的死亡多見(jiàn)于病程大于5年的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

14、義。
　　 5.河南漢族人群CCL3L1基因拷貝數(shù)的中位數(shù)為4，狼瘡腎炎組的高拷貝數(shù)比健康對(duì)照組發(fā)生率高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 6.CCL3L1拷貝數(shù)變異對(duì)狼瘡腎炎風(fēng)險(xiǎn)分析:低拷貝數(shù)是狼瘡腎炎的保護(hù)性因素(RR=0.685，P=0.018)，高拷貝數(shù)是風(fēng)險(xiǎn)因素(RR=1.392;P=0.039)，但多因素回歸分析提示僅低拷貝數(shù)是獨(dú)立的保護(hù)因素(RR=0.644:P=0.013)。
　　 7.

15、CCL3L1拷貝數(shù)變異與狼瘡腎炎臨床表型的相關(guān)性分析:CCL3L1高拷貝數(shù)可以明顯增加抗ds-DNA抗體的陽(yáng)性率(RR=1.794;P=0.033)、尿蛋白的含量(RR=1.629;P=0.009)、腎臟病理活動(dòng)指數(shù)(RR=1.140;P=0.025)的風(fēng)險(xiǎn)。
　　 結(jié)論:
　　 1.河南漢族狼瘡腎炎長(zhǎng)期生存率較其他種族低。
　　 2.大量蛋白尿及腎功能降低是影響生存的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素，長(zhǎng)期服用激素及羥氯喹、防止心血