99mTc-RGD顯像評(píng)價(jià)血管內(nèi)皮抑制素對(duì)H22肝癌療效的研究.pdf

1、目的:本研究采用99mTc標(biāo)記的環(huán)形CDCRGDCKC多肽(99mTc-RGD-4CK)作為顯像劑,對(duì)抗血管生成藥(恩度)治療過(guò)的H22肝癌小鼠進(jìn)行顯像及體內(nèi)分布研究,探討恩度與99mTc-RGD-4CK之間是否存在競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系及顯像劑(99mTc—RGD-4CK)在監(jiān)測(cè)恩度對(duì)H22肝癌療效方面的價(jià)值。
　　 方法:
　　 第一部分:檢測(cè)恩度是否抑制腫瘤組織對(duì)顯像劑(99mTC-RGD-4CK)的攝取
　　 選取12

2、只生長(zhǎng)良好,腫瘤大小無(wú)明顯差異的荷瘤KM小鼠,隨機(jī)分為三個(gè)實(shí)驗(yàn)組(a、b、c)和一個(gè)對(duì)照組(d),每組3只,實(shí)驗(yàn)組分別于尾靜脈注射高、中、低濃度的恩度及固定劑量的顯像劑；對(duì)照組注射相同體積的生理鹽水及顯像劑。兩小時(shí)后,行SPECT顯像,利用感興趣區(qū)技術(shù)(ROI),測(cè)量腫瘤組織(T)與對(duì)側(cè)肢體肌肉組織(NT)的放射性計(jì)數(shù),計(jì)算T/NT值；顯像完畢后眼球取血,脫頸處死,取腫瘤組織,稱重并測(cè)量放射性計(jì)數(shù),計(jì)算每克組織的百分注入活度(％ID/g

3、)。然后對(duì)每組腫瘤組織的T/NT值及％ID/g值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 第二部分:監(jiān)測(cè)療效
　　 選取36只生長(zhǎng)良好,腫瘤大小無(wú)明顯差異的荷瘤KM小鼠,按隨機(jī)數(shù)字表法平均分為4組(A、B、C、D),每組9只,分別于腹腔注射高、中、低濃度的恩度及相同體積的生理鹽水,每天用藥一次。再將各組隨機(jī)分為三組,分別給予三天、五天、七天的上述藥物治療后進(jìn)行療效的監(jiān)測(cè)。
　　 1 SPECT顯像:各組荷瘤小鼠尾靜脈注射顯像劑18

4、.5MBq(500uCi)/0.2ml后兩小時(shí)進(jìn)行顯像,利用感興趣區(qū)(ROI)技術(shù),測(cè)量腫瘤部位(T)與對(duì)側(cè)肢體肌肉部位(NT)的放射性計(jì)數(shù),計(jì)算(T/NT)值,并對(duì)各組的T/NT值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 2生物分布的研究:顯像完畢后眼球取血,脫頸處死,完整取下腫瘤組織,測(cè)量其最大徑(L)及最短徑(W)計(jì)算體積V=LW2/2。然后取心、肝、肺、脾、胃、小腸、腎及腫瘤對(duì)側(cè)肢體肌肉和骨,稱重并測(cè)量放射性計(jì)數(shù),計(jì)算各個(gè)臟器及腫瘤的每克

5、組織百分注入活度(％ID/g),進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,并與SPECT。顯像所得的T/NT值進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　 3免疫組織化學(xué)的研究:取適量腫瘤組織,以10％的福爾馬林固定,常規(guī)石蠟切片,CD34免疫組化染色,BCIP/NBT顯色,判斷微血管密度(MVD),對(duì)各組微血管密度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,并與腫瘤的％ID/g值進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　 結(jié)果:
　　 第一部分:檢測(cè)恩度是否抑制腫瘤組織對(duì)顯像劑攝取的研究中,a、b、c、d

6、四組腫瘤組織的％ID/g值及T/NT值分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果顯示差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),這表明恩度與顯像劑之間無(wú)競(jìng)爭(zhēng)作用,且其注射劑量不影響腫瘤組織對(duì)顯像劑的攝取。
　　 第二部分:監(jiān)測(cè)恩度對(duì)H22肝癌療效的研究
　　 1第一次療效監(jiān)測(cè)
　　 1.1 SPECT顯像的結(jié)果
　　 治療三天,各組腫瘤與肌肉組織的放射性比值(T/NT),中劑量組最小(2.92±0.30),生理鹽水組最大(3.26±0

7、.37)。方差分析顯示四組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.3191>0.05)。
　　 1.2腫瘤的體積
　　 治療三天,各組腫瘤組織的體積(cm),中劑量組最大(0.94±0.37),低劑量組最小(0.49±0.6),方差分析結(jié)果顯示四組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.1163>0.05)。
　　 1.3生物分布的結(jié)果
　　 治療三天,各組腫瘤組織的每克組織百分注入活度分別為(％ID/g):5.12±0.3

8、5、5.29±0.36、5.59±0.25、5.70±0.26,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析四組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.1582>0.05)。
　　 1.4免疫組化的結(jié)果
　　 治療三天,各組腫瘤組織的微血管密度(MVD)值分別為(個(gè)/視野):14.6±2.07,16.2±1.92,17.2±2.59,18.0±3.87經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.27>0.05)。
　　 2第二次療效監(jiān)測(cè)
　　

9、2.1 SPECT顯像的結(jié)果
　　 治療五天,各組腫瘤組織的T/NT值經(jīng)單因素方差分析,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.4836>0.05)。
　　 2.2腫瘤體積的結(jié)果
　　 治療五天,各組的腫瘤體積經(jīng)單因素方差分析,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.88>0.05)。
　　 2.3生物分布的結(jié)果
　　 治療五天,各組腫瘤組織的％ID/g值分別為(％ID/g):4.02±0.08、5.54±0.27、5.37

10、±0.25、5.63±0.35,經(jīng)單因素方差分析高劑量組與其余三組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0002<0.05)。中劑量組、低劑量組與對(duì)照組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.4免疫組化的結(jié)果
　　 治療五天,各組中腫瘤組織的MVD值(個(gè)/視野),高劑量組最低(11.2±1.5),對(duì)照組最高(19.4±2.7),中、低劑量組居中(13.4±2.3,15.8±1.6),經(jīng)單因素方差分析四組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.00

11、01),其中三個(gè)治療組與對(duì)照組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,高劑量組與低劑量組差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3第三次療效監(jiān)測(cè)
　　 3.1 SPECT顯像的結(jié)果
　　 治療七天,各組腫瘤組織的T/NT值經(jīng)單因素方差分析差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.2291>0.05)。
　　 3.2腫瘤體積的結(jié)果
　　 治療七天,各組的腫瘤體積經(jīng)單因素方差分析差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.8039>0.05)。
　　 3

12、.3生物分布的結(jié)果
　　 治療七天,各組腫瘤每克組織的百分注入活度(％ID/g)高劑量組最小(3.69±0.26),其次為中劑量組(3.91±0.44),對(duì)照組最大(5.4±0.10)。經(jīng)單因素方差分析四組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0007<0.05),其中高、中劑量組與對(duì)照組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而低劑量組與對(duì)照組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.4免疫組化的結(jié)果
　　 治療七天,各組的MVD值分別為(個(gè)/視

13、野):9.4±2.6,11.4±2.7,13.2±1.48,19.6±3.36。經(jīng)單因素方差分析,四組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.0001),其中三個(gè)治療組與對(duì)照組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,三治療組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4相關(guān)性研究
　　 4.1腫瘤組織的MVD值與％ID/g值進(jìn)行相關(guān)性研究,兩者呈正相關(guān)(r=0.8501,P=0.0005<0.05)。
　　 4.2腫瘤組織的MVD值與SPECT顯像的腫瘤組

14、織T/NT值進(jìn)行相關(guān)性研究,兩者呈正相關(guān)(r=0.8039,P=0.0016<0.05)。
　　 4.3用生物分布得出的腫瘤組織的％ID/g值與肌肉組織的％ID/g值作比得到的腫瘤T/NT值與SPECT顯像得出的T/NT值進(jìn)行相關(guān)分析研究,結(jié)果兩者無(wú)相關(guān)性(r=0.5384,P=0.0709>0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1實(shí)驗(yàn)第一部分
　　 恩度在一定劑量(<0.84mg)范圍內(nèi)與顯像劑(99mTc