人血管內(nèi)皮抑制素vasostatin基因抑制裸鼠種植性肝癌血管生成的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景和目的
　　 目前研究表明血管生成與腫瘤的生物學(xué)行為密切相關(guān)。肝癌是富血管性腫瘤，其高血供、高轉(zhuǎn)移、高復(fù)發(fā)的特點(diǎn)提示血管生成在肝癌的惡性生物學(xué)行為中扮演著十分重要的角色。研究發(fā)現(xiàn)，人血管內(nèi)皮抑制素vasostatin基因不僅在多種實(shí)體腫瘤細(xì)胞表面有高水平的表達(dá)，而且在腫瘤組織新生血管內(nèi)皮細(xì)胞有強(qiáng)烈表達(dá)。因此，選擇人血管內(nèi)皮抑制素vasostatin基因或者單克隆抗體來(lái)治療腫瘤是近年腫瘤研究的一個(gè)熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組化技

2、術(shù)探討了人血管內(nèi)皮抑制素vasostatin基因治療裸鼠皮下種植性人肝細(xì)胞癌的效果，以及對(duì)肝癌血管生成及腫瘤細(xì)胞凋亡的影響，為肝癌基因治療提供新的思路和方法。研究方法：
　　 1.構(gòu)建人血管內(nèi)皮抑制素vasostatin基因表達(dá)載體vasostatin/pcDNA3.1并轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)菌，提取質(zhì)粒酶切鑒定。
　　 2.60只4周齡雄性裸鼠皮下接種人肝癌細(xì)胞株HepG2，建立肝癌動(dòng)物模型。
　　 3.成瘤裸鼠隨機(jī)分為

3、2組，每組30只。應(yīng)用電轉(zhuǎn)染方法行人血管內(nèi)皮抑制素vasostatin基因治療，對(duì)照組以等量空殼質(zhì)粒替代。觀察腫瘤生長(zhǎng)情況并記錄腫瘤大小，6周后切取腫瘤秤重，計(jì)算抑瘤率。
　　 4.應(yīng)用免疫組化技術(shù)分別檢測(cè)整合素反義基因治療前后裸鼠種植肝癌組織中vasostatin蛋白的表達(dá)及其微血管密度(MVD)。
　　 5.應(yīng)用TUNEL法檢測(cè)治療組與對(duì)照組腫瘤細(xì)胞凋亡，計(jì)算凋亡指數(shù)(AI)并進(jìn)行組間比較。結(jié)果
　　 1.治

4、療組與對(duì)照組裸鼠種植瘤的生長(zhǎng)情況有明顯差異，對(duì)照組、vasostatin基因組的平均瘤重分別是(1.23±0.82)g、(0.81±0.62)g，兩組比較有顯著性差異(p＜0.05)。
　　 2.對(duì)照組、vasostatin組的MVD分別是18.26±1.72、5.62±0.59，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較差異顯著(p＜0.05)。
　　 3.對(duì)照組、vasostatin組的AI分別為6.25±1.32、16.48±0.96，實(shí)