小窩蛋白-1對A549細胞磷酸膽堿二胞苷酰轉移酶的影響及作用機制初探.pdf

1、目的:觀察小窩蛋白-1(caveolin-1)對A549細胞磷酸膽堿二胞苷酰轉移酶(CTP)表達的影響;探討核因子κB（NF-κB）信號轉導途徑在磷酸膽堿二胞苷酰轉移酶合成中的作用，為臨床有關呼吸系統(tǒng)疾病的研究提供依據(jù)和參考。
　　方法:以研究肺表面活性物質常用的A549細胞作為研究對象，運用小分子RNA干擾(siRNA)的方法構建小窩蛋白-1低表達模型;并用蛋白印跡法(western blot)檢測小窩蛋白-1的表達變化;實驗分

2、組如下:①按量效關系分組:siRNAN濃度為1.0μmol/l、3.0μmol/l、5.0μmol/l;②按轉染時間分組:0h組、24h組、48h組、72h組;③選取5.0μ mol/l的siRNA，轉染時間為72h分組:為轉染試劑組，siRNA處理組，錯義鏈RNA組;④按小窩蛋白-1對磷酸膽堿二胞苷酰轉移酶表達影響分組:轉染試劑組（正常對照組），siRNA處理組（實驗處理組），錯義鏈RNA組（陰性對照組）;⑤NF-κB表達分組:轉染試

3、劑組，siRNA處理組，錯義鏈組;其他實驗條件均相同。之后對其進行總蛋白的提取，隨后蛋白印跡法檢測磷酸膽堿二胞苷酰轉移酶的表達;最后對核蛋白進行提取并檢測核蛋白P65的表達。
　　結果:
　　1.濃度分別為1.0μmol/l，3.0μmol/l，5.0μmol/l的siRNA孵育細胞后，5.0μmol/l的siRNA與1.0μmol/l的siRNA條帶相比小窩蛋白-1的表達降低。
　　2.于0h，24h，48h，72h

4、分別孵育細胞后，72h組與0h組相比小窩蛋白-1的表達降低。
　　3.5μmol/l siRNA，轉染細胞72h，小窩蛋白-1表達下降，轉染組與錯義鏈組相比，小窩蛋白-1的表達降低。
　　4.蛋白印跡法檢測磷酸膽堿二胞苷酰轉移酶表達下降;轉染組相對錯義鏈組小窩蛋白-1的表達明顯降低。
　　5.提取A549細胞核蛋白后蛋白印跡檢測胞核蛋白p65，胞核蛋白p65表達下降。轉染組相對錯義鏈組p65表達明顯降低。
　　結