乏氧通過腺苷A2受體調節(jié)人成熟樹突狀細胞骨橋蛋白的表達.pdf

1、研究目的:觀察乏氧對人成熟樹突細胞(mDC)分泌骨橋蛋白(OPN)的影響,探討乏氧調節(jié)人成熟樹突狀細胞(mDC)骨橋蛋白(OPN)表達的機制。
　　 方法:免疫磁珠法分離健康人外周血CD14+單核細胞,分別在常氧和乏氧條件下經(jīng)GM-CSF及IL-4培養(yǎng)7天,體外誘導為人成熟樹突細胞(mDC);ELISA檢測培養(yǎng)上清中骨橋蛋白(OPN)水平,RT-PCR檢測人成熟樹突細胞(mDC)中骨橋蛋白(OPN)基因水平表達;流式細胞術(FA

2、CS)鑒定樹突狀細胞(DC)表型并檢測成熟樹突狀細胞(mDC)胞內骨橋蛋白(i-OPN)表達水平;使用腺苷替代物(NECA)、特異性A2受體激動劑(CGS21680)和特異性A2受體拮抗劑(SCH58261)探討A2受體(A2R)在調節(jié)人mDC表達OPN中發(fā)揮的作用;利用重組人TGF-β1(rhTGF-β1)及抗TGF-β1單克隆抗體(anti-TGF-β1 Ab)檢測TGF-β1在這一過程中發(fā)揮的作用;采用SPSS13.0 for w

3、indows統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。
　　 結果:
　　 ①無論乏氧環(huán)境或常氧環(huán)境下誘導培養(yǎng)的樹突狀細胞(DC)均可達到表型成熟;
　　 ②乏氧環(huán)境在分泌蛋白及轉錄水平顯著上調mDCs對OPN的表達,乏氧組OPN的水平較正常氧條件下增加3.28倍,OPN mRNA水平也同步升高,差異有統(tǒng)計學意義;
　　 ③常氧條件下,腺苷替代物(NECA)和A2R激動劑均能顯著上調mDCs對OPN mRNA的表達及

4、誘導OPN蛋白的分泌,A2R拮抗劑可同時在分泌及轉錄水平特異性抑制A2R激動劑對OPN的誘導;
　　 ④乏氧環(huán)境不能調控mDC對i-OPN的表達;
　　 ⑤A2R信號激活與否都不參與調控mDC對i-OPN的表達;
　　 ⑥常氧條件下,A2R激動劑促使mDCs產生TGF-β1增加1.36倍,A2R拮抗劑下調mDCs分泌TGF-β1,差異有統(tǒng)計學意義;A2R參與調控免疫調節(jié)因子TGF-β1水平,通過rhTGF-β1和