白藜蘆醇通過對MTA1-HDAC1表達(dá)水平的調(diào)控參與子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞增殖和侵襲的研究.pdf

1、目的：
　　研究白藜蘆醇在體外對人子宮內(nèi)膜癌ERα(+)的Ishikawa細(xì)胞增殖和侵襲能力的影響，以及對ERα，HDAC1和MTA1表達(dá)水平的調(diào)控作用，探討白藜蘆醇抗子宮內(nèi)膜癌的可能機(jī)制。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞株，使用不同濃度白藜蘆醇(0、25、50、100μM)作用不同時間(0、12、24、48、72h)，Realtime-PCR技術(shù)檢測ERα及MTA1 mRNA表達(dá)水平的變化;W

2、estern blot技術(shù)檢測ERα、MTA1及HDAC1蛋白質(zhì)表達(dá)的變化;并應(yīng)用MTT比色法檢測細(xì)胞增殖能力，人工重組基底膜侵襲小室(Transwell)檢測細(xì)胞侵襲能力。
　　結(jié)果：
　　1、白藜蘆醇作用12h時，對細(xì)胞活性和增殖能力無明顯影響;而作用24、48和72h時，顯著抑制了Ishikawa細(xì)胞的活性及相對細(xì)胞增殖能力，呈濃度依賴性。各個時間點(diǎn)，白藜蘆醇均濃度依賴性地抑制了Ishikawa細(xì)胞的侵襲能力。

3、　　2、白藜蘆醇作用后，均下調(diào)了MTA1 mRNA的表達(dá)水平，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。白藜蘆醇作用后呈濃度依賴性地上調(diào)了ERα mRNA的表達(dá)水平，其中100μM作用12h時，25、50及100μM作用24h時，50及100μM作用48h和72h時，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.01）。
　　3、白藜蘆醇作用后，呈濃度依賴性地下調(diào)MTA1和HDAC1蛋白的表達(dá)水平，無明顯的時間依賴性;其中50、100μM作用12h和48

4、h時，25、50及100μM作用24h時，25、50μM作用72h時，MTA1蛋白表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);50、100μM作用12h、48h和72h時，25、50及100μM作用24h時，HDAC1蛋白表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）。白藜蘆醇作用12h后，對ERα蛋白的表達(dá)無顯著地調(diào)節(jié)作用;25、50及100μM白藜蘆醇作用24h以及25、50μM作用48h后，均上調(diào)了ERα蛋白的表達(dá)水平，除25μM作用48h外

5、，余差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）。而100μM作用48h后下調(diào)ERα蛋白的表達(dá)水平，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。至72h時，25、50及100μM均下調(diào)了ERα蛋白的表達(dá)水平，呈濃度依賴性，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）。
　　4、白藜蘆醇作用后，MTA1的mRNA(Spearman相關(guān)系數(shù)=0.616，p=0.000)、蛋白（Spearman相關(guān)系數(shù)=0.514，p=0.000）以及HDAC1的蛋白(Spearman相關(guān)系數(shù)

6、=0.605，p=0.000)表達(dá)與Ishikawa細(xì)胞增殖能力呈正向直線相關(guān)。MTA1的mRNA（Pearson相關(guān)系數(shù)r=0.669，p=0.000）、蛋白（Pearson相關(guān)系數(shù)r=0.315，p=0.029）以及HDAC1的蛋白（Pearson相關(guān)系數(shù)r=0.289，p=0.047）與Ishikawa細(xì)胞侵襲能力呈正向直線相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　白藜蘆醇呈濃度依賴性地抑制子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞增殖和侵襲能力，