KDR基因啟動子區(qū)變異影響豬肌內(nèi)脂肪含量的分子調(diào)控機制.pdf

1、豬肌內(nèi)脂肪含量（Intramuscular fat，IMF）是影響豬肉品質(zhì)和感官特性的重要因素。含激酶插入?yún)^(qū)受體(kinase-insert domain receptor, KDR)作為一種血管內(nèi)皮生長因子受體，在血管內(nèi)皮生長因子誘導的血管發(fā)生中發(fā)揮重要的作用，而血管生成是脂肪細胞生長和脂肪沉積的物質(zhì)基礎。本研究以KDR作為候選基因，分析KDR基因表達水平與肌內(nèi)脂肪含量的關系，進一步通過測序發(fā)掘啟動子區(qū)域單核苷酸多態(tài)性(Singlen

2、ucleotide polymorphism，SNP)及其對豬背最長肌IMF沉積的影響。結(jié)果如下:
　　免疫組化切片顯示，KDR蛋白特異性表達于肌肉組織中的肌纖維間隙中的毛細血管上，在脂肪組織和肌肉組織中沒有表達。定量結(jié)果顯示，KDR基因表達量在IMF含量高組表達量顯著高于IMF含量低組，KDR基因表達量與IMF相關分析發(fā)現(xiàn)，二者存在極顯著正相關(r=0.47，P＜0.01)。通過DNA混池測序發(fā)現(xiàn)KDR啟動子區(qū)域三個新的SNP位

3、點，在IMF含量高組和低組中等位基因分布模式存在差異，分別為:c.-1316A＞G，c.-1303C＞T和c.-1108A＞C。在105頭純種二花臉和98頭商品雜交豬（杜洛克×長白豬×約克夏，D×L×Y）中進行基因分型，發(fā)現(xiàn)這三個SNP位點完全連鎖，在二花臉群體中存在ACA或GTC單倍型，而在D×L×Y群體中僅存在GTC單倍型，且這兩種單倍型與IMF含量相關，ACA單倍型與高IMF含量相關，GTC與低IMF含量相關。另外，c.-998G

4、＞C位點在二花臉和商品雜交豬中均存在，該位點與IMF含量不相關。c.-873G＞A和c.-816A＞G兩個SNP位點也特異性存在于二花臉中，該兩個位點完全連鎖，形成GA和AG兩種單倍型。
　　無論是KDR基因表達還是雙熒光素酶活性報告，ACA啟動子均比GTC啟動子具有較高的KDR基因轉(zhuǎn)錄活性，二者差異顯著(P＜0.05)。點突變結(jié)果顯示，c.-1316A＞G中G突變?yōu)锳能夠引起KDR基因啟動子活性升高。此外，還發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮細胞標記