經(jīng)典型Bartter綜合征CLCNKB基因突變分析.pdf

1、背景：Bartter綜合征(Bartter syndrome，BS)是一組臨床表現(xiàn)為腎性失鹽、低鉀血癥、代謝性堿中毒、血漿腎素-血管緊張素-醛固酮活性增高、而血壓正?；蚱偷倪z傳性腎小管疾病，主要為常染色體隱性遺傳。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，近年來對其發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識不斷深入，六個編碼腎小管轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白或離子通道的基因突變可引起B(yǎng)artter綜合征，即Ⅰ-Ⅴ型Bartter綜合征和Gitelman綜合征。編碼Na-K-2C1聯(lián)合轉(zhuǎn)運(yùn)體NKCC

2、2的SLC12A1基因突變導(dǎo)致Ⅰ型Bartter綜合征；編碼鉀通道蛋白ROMK的KCNJ1基因突變導(dǎo)致Ⅱ型Bartter綜合征；編碼氯通道蛋白CIC-Kb的CLCNKB基因突變導(dǎo)致Ⅲ型Bartter綜合征；編碼氯通道蛋白CIC-K的β亞單位bartin基因(BSND)突變導(dǎo)致Ⅳ型Bartter綜合征；編碼鈣敏感受體CaSR的CASR基因激活突變導(dǎo)致V型Bartter綜合征，為常染色體顯性遺傳。Gitelman綜合征是由編碼噻嗪類敏感的鈉

3、氯共同轉(zhuǎn)運(yùn)體NCCT的SLC12A3基因突變導(dǎo)致，其為Bartter綜合征的變異型。CLCNKB基因突變導(dǎo)致Ⅲ型Bartter綜合征。Ⅲ型Bartter綜合征即經(jīng)典型Bartter綜合征，臨床表現(xiàn)多樣，大多為嬰幼兒或兒童發(fā)病，表現(xiàn)為煩渴、多尿、夜尿增多、嗜鹽、脫水，可伴便秘或嘔吐，生長發(fā)育遲緩，尿鈣可正?；蜉p度增高，很少發(fā)現(xiàn)腎鈣化，早期腎功能多正常。部分患兒有孕期羊水過多和早產(chǎn)史。Ⅲ型Bartter綜合征的基因型和表現(xiàn)型差異比較大。少數(shù)

4、可表現(xiàn)為新生兒型Bartter綜合征，新近有報道表現(xiàn)為混合性Bartter-Gitelman綜合征。由于Ⅲ型Bartter綜合征臨床表型多樣，CLCNKB基因的突變分析和基因功能研究有助于疾病的診斷、治療、優(yōu)生優(yōu)育及闡明Barter綜合征的遺傳學(xué)基礎(chǔ)。
　　 目的：為了了解經(jīng)典型Bartter綜合征患者的基因突變情況，探討其發(fā)病機(jī)制，提高對該類疾病的認(rèn)識，本研究對1例經(jīng)典型Bartter綜合征家系CLCNKB基因突變進(jìn)行分析。<

5、br>　　 方法：提取該家系各成員患者外周血淋巴細(xì)胞基因組DNA，應(yīng)用聚合酶連反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增CLCNKB基因全部外顯子及側(cè)翼序列，并直接測序檢測突變。選取50例無親緣關(guān)系的正常人作為對照。
　　 結(jié)果：⑴患者的臨床資料：患兒女，出生后4個月發(fā)病，以腹瀉2個月，發(fā)熱、嘔吐3天于當(dāng)?shù)蒯t(yī)院住院治療，因低鉀低氯代謝性堿中毒，高腎素、高醛固酮血癥，診斷為巴特綜合征?；純?年來間斷服用消炎痛，口服氯化鉀。7歲時來我院復(fù)查，臨床表現(xiàn)為煩

6、渴、多飲、多尿、嗜鹽，便秘，肌無力，反復(fù)手足抽搦，無血尿，無泡沫尿等。查體：身高110cm，體重21公斤，血壓90/65mmHg，生長發(fā)育遲緩，右踝內(nèi)翻。實(shí)驗(yàn)室檢查：低血鉀，代謝性堿中毒，高腎素、血管緊張素，高醛固酮血癥，血常規(guī)及尿常規(guī)均正常。泌尿系及腎上腺B超未見異常，未行腎活檢，臨床診斷為經(jīng)典型Bartter綜合征。除患者外，父母及其家系成員均無Bartter綜合征的臨床表現(xiàn)，血電解質(zhì)及尿液檢查均正常。⑵基因檢測結(jié)果：在該患者中檢測

7、到1個雜合（錯義）突變。其第4號外顯子，第482位堿基T→G突變，造成第161位氨基酸由亮氨酸變?yōu)榫彼?482T＞G，L161R);家系中母親為雜合突變(L161R雜合突變)，父親未發(fā)現(xiàn)突變；查閱國內(nèi)外文獻(xiàn)及人類基因突變數(shù)據(jù)庫，L161R未見報道，屬新發(fā)現(xiàn)的突變。另外測序結(jié)果發(fā)現(xiàn)CLCNKB基因外顯子編碼區(qū)域內(nèi)單核苷酸多態(tài)性(coding SNP，cSNP)位點(diǎn)共8個，均為已報道位點(diǎn)。
　　 結(jié)論：通過直接測序，對1例經(jīng)典型B