叉頭轉(zhuǎn)錄因子O1對(duì)高糖培養(yǎng)大鼠腎小球系膜細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響.pdf

1、背景與目的：
　　 糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是最常見的糖尿病(Diabetes mellitus,DM)微血管并發(fā)癥之一,終末期腎功能衰竭(end stage renalfailure,ESRF)的首要病因。DN發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,是多途徑相互聯(lián)系作用的結(jié)果,其中腎臟氧化應(yīng)激的增強(qiáng)被認(rèn)為是造成DN各種損害的共同機(jī)制和重要因素。FoxO1(forkheadtranscription factor O1

2、,FoxO1)是叉頭轉(zhuǎn)錄因子家族的一員,其可通過激活下游抗氧化靶基因表達(dá),發(fā)揮重要的抗氧化應(yīng)激作用。
　　 白藜蘆醇(resveratrol,Resv)是公認(rèn)的去乙?；?Sirtl)特異性激活劑,其可通過激活Sirtl使FoxO1去乙?；罅姿峄较陆?轉(zhuǎn)錄活性增強(qiáng)。因此,本研究通過高糖培養(yǎng)腎小球系膜細(xì)胞(MCs),體外模擬DN環(huán)境,分別用白藜蘆醇和FoxO1shRNA處理高糖培養(yǎng)的MCs,以上調(diào)FoxO1活性或抑制其表達(dá),

3、觀察FoxO1對(duì)MCs內(nèi)氧化應(yīng)激的影響并對(duì)其下游機(jī)制進(jìn)行探討。
　　 材料與方法：
　　 分別用白藜蘆醇(resveratrol,Resv)和FoxO1shRNAt(short hairpin RNA)作用于高糖(30mmol/L)培養(yǎng)的MCs。以葡萄糖濃度(5.6mmol/L)培養(yǎng)的MCs為正常對(duì)照組(NG),將高糖培養(yǎng)的MCs分為5組:高糖組(HG)、HG+Resv組(Resv20mmol/L)、HG+FoxOlsh

4、RNA轉(zhuǎn)染組、HG+Resv+FoxO1shRNA轉(zhuǎn)染組、HG+shNC(陰性轉(zhuǎn)染)對(duì)照組。培養(yǎng)72h后,用熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)各組MCs內(nèi)活性氧(ROS)水平:RT-PCR檢測(cè)去乙?；?Sirtl)、FoxO1、錳超氧化物歧化酶(MnSOD)mRNA表達(dá);Western-blot檢測(cè)FoxO1及磷酸化FoxO1(p-FoxO1)水平。
　　 結(jié)果：
　　 1.與NG組相比,HG組Sirtl mRNA表達(dá)下降,p-FoxO1

5、水平升高,轉(zhuǎn)錄活性降低,MnSOD mRNA表達(dá)下降,ROS水平升高(均P＜0.05):
　　 2.與HG組相比,HG+FoxOlshRNA轉(zhuǎn)染組FoxO1表達(dá)被抑制,MnSODmRNA表達(dá)更低,ROS水平更高(均P＜0.05);
　　 3.與HG組相比,HG+Resv組Sirtl mRNA表達(dá)升高,P-FoxO1水平下降,MnSOD mRNA表達(dá)升高,ROS水平下降(均P＜0.05);
　　 4.與HG+Res