Benazepril Hydrochloride對高糖培養(yǎng)的大鼠腎小球系膜細胞ILK、α-SMA表達的影響及意義.pdf

1、目的：觀察高糖培養(yǎng)下腎小球系膜細胞對ILK的表達以及Benazepril對ILK的表達的干預作用。目前糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)已經(jīng)成為在美國和歐洲引起終末期腎病(ESRD)最常見的原因，是糖尿病最嚴重的并發(fā)癥之一，但是迄今為止DN的發(fā)病和早期預防措施并不明確。DN主要的病理改變是：腎小球基底膜增厚、腎小球系膜細胞(Glomerular mesangial cell，GMC)增殖與系膜基質(zhì)的積聚，最終導

2、致腎小球硬化。GMC是腎小球中最活躍的細胞，對于維持腎臟正常組織結(jié)構(gòu)和生理功能發(fā)揮著重要作用，因此積極探討GMC在生理、病理下的變化機制對于臨床DN的防治和早期發(fā)現(xiàn)具有重大而深遠的的意義。 整合素連接激酶(Intergrin-linked Kinase，ILK)是一種存在于細胞胞漿中的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，通過多種信號傳導通路，包括整合素、生長因子及Wnt信號傳導通路，來參與調(diào)節(jié)細胞的黏附、維持細胞存活、抑制細胞凋亡、控制細胞

3、形態(tài)和基因的表達。近年來研究發(fā)現(xiàn)正常的腎臟組織中ILK在GMC表達較弱或幾乎不表達，但ILK表達的增高常伴隨GMC細胞增殖及細胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)分泌。α平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)是血管平滑肌特有的細胞骨架蛋白，即血管平滑肌的標志，正常成熟的GMC是不表達的。但在病理情況下GMC發(fā)生表型轉(zhuǎn)化可表達α-SMA，其表達情況和GMC增殖改變，細胞外基質(zhì)的積聚

4、，腎功能持續(xù)下降密切聯(lián)系。而DN早期病理改變主要就是GMC增殖肥大和ECM積聚，因此探討ILK、α-SMA與GMC增殖及ECM分泌的關系，可以更加深入闡明DN的發(fā)病機制。 Benazepril(貝那普利)是新一代血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)，它通過抑制血管緊張素轉(zhuǎn)換酶，使循環(huán)和組織中血管緊張素Ⅱ(Ang Ⅱ)減少，并同時減少Ang Ⅱ的刺激，阻止其與受體AT1結(jié)合。有實驗證明高糖刺激下的GMC可自分泌Ang Ⅱ，后者和GMC膜上A

5、T1結(jié)合，進而導致了GMC內(nèi)PKC等通路的活化，引起一些其他細胞生長因子基因和蛋白的異常表達，致使GMC增殖和分化。本實驗利用貝那普利進行干預，觀察ILK、α-SMA在高糖培養(yǎng)GMC的表達及藥物的保護作用，為臨床DN防治提供實驗性理論依據(jù)。 方法：腎小球系膜細胞，常規(guī)培養(yǎng)消化傳代，將其隨機分為四組：即正常糖對照組(D-葡萄糖5.5mmol/L，NG組)、甘露醇組(甘露醇20mmol/L，MG組)、高糖組(D-葡萄糖30 mmol

6、/L，HG組)、高糖+Benazepril干預組(D-葡萄糖30mmol/L+唄那普利10μmol/L，HG+Benazepril)分別培養(yǎng)。四組于實驗開始后3、6、12、24、48、72h收集細胞，用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)法檢測GMC中ILK、α-SMA mRNA的表達，用western blot法檢測各實驗組GMC中ILK、α-SMA蛋白的表達。 結(jié)果：1.細胞培養(yǎng)結(jié)果：倒置相差顯微鏡下可見MC呈梭形、不規(guī)則

7、星形或三角形的、樹枝形，當細胞密集時可重疊生長，胞漿多突起，有大量微絲樣結(jié)構(gòu)，核居中央，多呈圓形或橢圓形； 2.高糖環(huán)境中GMC ILK mRNA和蛋白水平3h時較正常糖組明顯升高(P<0.05)，且隨時間延長有增高趨勢(P<0.05)，表達量在48h達到最高(P<0.05)，但在72h開始下降(P<0.05)。藥物干預后上述指標較高糖組表達水平下降，但未能恢復至對正常照組水平(P<0.01)；同時間點甘露醇組ILK mRNA和蛋白水平

8、與正常糖組無明顯差別(P>0.05)。3.高糖環(huán)境中GMC α-SMA mRNA和蛋白水平較正常糖組升高(P<0.01)，隨時間延長逐漸增高(P<0.05)，表達量在72h達到最高(P<0.01)，藥物干預后上述指標較高糖組表達水平下降(P<0.01)，但未能恢復至對照組水平(P<0.05)；同時間點甘露醇組α-SMA mRNA和蛋白水平與較正常糖組升高(P<0.05)，不能排除高糖組滲透壓依賴性引起的α-SMA升高。 結(jié)論：上