HIV蛋白酶抑制劑在頸動脈導絲損傷內(nèi)膜增生中新機制探討.pdf

1、研究背景:
　　介入損傷后再狹窄是臨床常見問題，影響心腦血管疾病的長期療效，因此有必要需要新的工具新的靶點來解決該臨床困擾。HIV蛋白酶抑制劑Saquinavir(SQV)作為第一代批準的抗艾滋病藥物，近年來在臨床上發(fā)現(xiàn)它在腫瘤領(lǐng)域以及對抗急性炎癥反應(yīng)中的新作用，最近的研究表明它對肺動脈高壓以及平滑肌增殖通路同樣具有好的療效。血管內(nèi)膜新生是一個慢性炎癥反應(yīng)過程，平滑肌細胞，內(nèi)皮細胞和巨噬細胞相互作用，增殖的平滑肌細胞、浸潤的巨噬細

2、胞及細胞外基質(zhì)沉積構(gòu)成新生內(nèi)膜的主要成分。前期數(shù)據(jù)（未發(fā)表）表示Saquinavir在體外對于半胱氨酸蛋白酶V(Cathepsin V)有特異性抑制作用，人體Cathepsin V與小鼠Cathepsin L具有高度同源性。因此我們提出假說Saquinavir通過部分抑制Cathepsin L以及炎癥反應(yīng)來抑制內(nèi)膜增生。
　　研究方法:
　　根據(jù)藥物半衰期，術(shù)前3天術(shù)后28天每天予以saquinavir(2.5mg/kg)和

3、Ritonavir(0.0625mg/kg)腹腔注射，第28天取頸總動脈，H-E染色，計算內(nèi)中膜比值評估內(nèi)膜增生程度。運用qRT-PCR技術(shù)檢測SQV干預后早期(6h)頸動脈局部各炎癥因子變化水平。通過免疫熒光，蛋白活性及mRNA檢測頸動脈損傷后Cathepsin L的變化以及SQV干預是否對其產(chǎn)生影響。通過基因敲除及腺病毒局部轉(zhuǎn)染等技術(shù)確定Cathepsin L在頸動脈內(nèi)膜增生中的作用。體外實驗檢測炎癥刺激對內(nèi)皮和平滑肌的影響，以及S

4、QV能否抑制炎癥引起的細胞行為改變。
　　研究結(jié)果:
　　SQV/RTV作用可顯著抑制頸動脈內(nèi)膜增生，抑制頸動脈局部平滑肌含量以及巨噬細胞浸潤。頸動脈導絲損傷后可引起局部Cathepsin L活性，蛋白表達及mRNA水平顯著升高。SQV可以抑制局部Cathepsin L活性，蛋白表達以及mRNA水平的升高。頸動脈導絲損傷6h可誘導IL-6，TLR-4，HMGb1，CCR2 mRNA表達水平的升高，這些升高可被SQV干預顯著抑