雞毒霉形體代謝抑制性單克隆抗體的研制及初步應(yīng)用.pdf

1、本研究為了探索MG菌體抗原中，哪些是具有免疫保護性的MG蛋白抗原，擬制備針對MG的特異性單克隆抗體，通過代謝抑制試驗來篩選在體外能抑制MG代謝的單克隆抗體，再以篩選出的代謝抑制性單抗確定MG抗原性蛋白，為MG表達蛋白亞單位疫苗的研制奠定基礎(chǔ)。研究的主要內(nèi)容及結(jié)果如下。 1．雞毒霉形體MG-S<,6>單克隆抗體的研制。 以MG-S<,6>菌體懸液為抗原，按照一定的免疫程序免疫6周齡的BALB/c小鼠，將制備的免疫脾細胞與S

2、P2/0骨髓瘤細胞進行細胞融合。經(jīng)三次細胞融合，以間接ELISA篩選陽性雜交瘤細胞，對陽性雜交瘤細胞進行多次克隆最終獲得24株針對MG-S<,6>的特異性單克隆抗體。經(jīng)檢測這些單抗腹水及細胞培養(yǎng)上清的間接E12SA效價分別在1.00x10<'3>～2.05x1.0<'6>和2.00x10<'1>～2.56x10<'3>之間；獲得的雜交瘤細胞的染色體數(shù)目在79～95之間；從24種單抗中選出11種抗體效價較高的單克隆抗體腹水并測定其相對親和

3、力。結(jié)果表明，單抗1086b株雜交瘤細胞所分泌單抗具有50％OD<,450>值的稀釋度最高，濃度最低，即與MG-S<,6>全菌體抗原的親和力最高，其次為3G4b、1086a、1086c、1688a、1688b、3G4a、16G9a、16D5、16G9b和1684b。 2．雞毒霉形體代謝抑制性單克隆抗體的篩選及其抗抗原表位分析。 以本研究制備的24株單克隆抗體對1000CCU的MG-S<,6>菌液分別進行代謝制試驗，經(jīng)三次

4、重復(fù)試驗，篩選到11株對MG-S<,6>有明顯代謝抑制作用的單克隆抗體將11株單克隆抗體分別與MG-S<,6>全菌體抗原SDS-PAGE電泳分離條帶進行Western-blot反應(yīng)，結(jié)果183和3G4b單抗與56KD蛋白反應(yīng)；16D5與105KD蛋白反應(yīng)；1086b、1688b與64KD蛋白反應(yīng)；7G9a、7G9b、17C5a、16G9a與42KD蛋白反應(yīng)；17C5b出現(xiàn)了三條顯色帶分別在105KD、66KD和41KD的位置；16H6b