玉米赤霉烯酮單克隆抗體的研制及初步應用.pdf

1、揚州大學碩士學位論文玉米赤霉烯酮單克隆抗體的研制及初步應用姓名：賈紅申請學位級別：碩士專業(yè)：預防獸醫(yī)學指導教師：文其乙劉秀梵20050501霪塹玉鲞燾堡盟囡璺基匿盈馇鰒班劍壁蟄生厘崩≥玉米赤霉烯酮單克隆抗體的研制及初步應用研究生：賈紅導師：圓教授劉秀梵教授中文摘要玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)又稱F2毒素，是由鐮刀菌屬真菌在玉米、谷物上的生長過程中所產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物【l】，該毒索具有雌激素活性，嚴重影響哺乳動物的生殖器

2、官及其功能。該毒素不僅可以污染谷物、飼料，對動物造成毒性，而且還可以通過污染或殘留ZEN的肉、乳等動物源性食品進入人體，給人的健康造成威脅。由于ZEN是一種小分子半抗原，本研究采用化學方法將ZENO一羧甲氧肟分別與牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶聯(lián)合成人工完全抗原ZEN—BSA和zI、N—OvA，ZEN～BSA中ZEN、BSA兩者的偶聯(lián)摩爾比為6；l。用ZEN—BsA免疫BALB／e小鼠，通過間接ELISA檢測免疫小鼠體內(nèi)

3、的抗體產(chǎn)生情況，鑒定出ZENBSA偶聯(lián)物有較好的免疫原性。以50119ZENBSA免疫8周齡BALBIe小鼠，每隔兩周免疫一次，共免疫四次，經(jīng)尾靜脈加強免疫后取其脾細胞與骨髓瘤細胞SP2，o—Ag—14融合，以ZEN—OVA為檢測原，結合ZENBSA和BSA篩選出三株分泌抗ZEN單克隆抗體的雜交瘤細胞株，分別命名為2C7、3810和3D5。以ZENBSA為包被原，采用間接ELISA測得2C7、3810腹水效價均1：lxl06，而jD5腹

4、水效價只有l(wèi)：10240；以ZEN—O、，A為包被原，測得2C7、3810腹水效價為1：1600，而3D5腹水效價l：lxl06。經(jīng)亞類試劑盒鑒定，2C7、3D5單抗屬于IgM亞類，3810單抗屬于IgG2b亞類。阻斷ELIsA結果表明，2C7、3810和3D5三株單抗都具有ZEN特異性。以獲得的2C7、3810和3D5單抗為基礎，用HRPZEN偶聯(lián)物作為競爭抗原，建立了競爭ELISA方法，初步組裝成試劑盒，用于ZEN的免疫學檢測。結果