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1、揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文玉米赤霉烯酮單克隆抗體的研制及初步應(yīng)用姓名:賈紅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師:文其乙劉秀梵20050501霪塹玉鲞燾堡盟囡璺基匿盈馇鰒班劍壁蟄生厘崩≥玉米赤霉烯酮單克隆抗體的研制及初步應(yīng)用研究生:賈紅導(dǎo)師:圓教授劉秀梵教授中文摘要玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)又稱F2毒素,是由鐮刀菌屬真菌在玉米、谷物上的生長(zhǎng)過程中所產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物【l】,該毒索具有雌激素活性,嚴(yán)重影響哺乳動(dòng)物的生殖器
2、官及其功能。該毒素不僅可以污染谷物、飼料,對(duì)動(dòng)物造成毒性,而且還可以通過污染或殘留ZEN的肉、乳等動(dòng)物源性食品進(jìn)入人體,給人的健康造成威脅。由于ZEN是一種小分子半抗原,本研究采用化學(xué)方法將ZENO一羧甲氧肟分別與牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶聯(lián)合成人工完全抗原ZEN—BSA和zI、N—OvA,ZEN~BSA中ZEN、BSA兩者的偶聯(lián)摩爾比為6;l。用ZEN—BsA免疫BALB/e小鼠,通過間接ELISA檢測(cè)免疫小鼠體內(nèi)
3、的抗體產(chǎn)生情況,鑒定出ZENBSA偶聯(lián)物有較好的免疫原性。以50119ZENBSA免疫8周齡BALBIe小鼠,每隔兩周免疫一次,共免疫四次,經(jīng)尾靜脈加強(qiáng)免疫后取其脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞SP2,o—Ag—14融合,以ZEN—OVA為檢測(cè)原,結(jié)合ZENBSA和BSA篩選出三株分泌抗ZEN單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,分別命名為2C7、3810和3D5。以ZENBSA為包被原,采用間接ELISA測(cè)得2C7、3810腹水效價(jià)均1:lxl06,而jD5腹
4、水效價(jià)只有l(wèi):10240;以ZEN—O、,A為包被原,測(cè)得2C7、3810腹水效價(jià)為1:1600,而3D5腹水效價(jià)l:lxl06。經(jīng)亞類試劑盒鑒定,2C7、3D5單抗屬于IgM亞類,3810單抗屬于IgG2b亞類。阻斷ELIsA結(jié)果表明,2C7、3810和3D5三株單抗都具有ZEN特異性。以獲得的2C7、3810和3D5單抗為基礎(chǔ),用HRPZEN偶聯(lián)物作為競(jìng)爭(zhēng)抗原,建立了競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,初步組裝成試劑盒,用于ZEN的免疫學(xué)檢測(cè)。結(jié)果
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