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文檔簡介
1、目的:系統(tǒng)性紅斑狼瘡這一典型的自身免疫性疾病,其病理生理機制的闡明及疾病明確定義的提出一直受到復雜的臨床癥狀和多發(fā)性臟器系統(tǒng)受累的阻礙?,F(xiàn)行的診斷標準依賴于已出現(xiàn)的臨床癥狀而未強調(diào)涉及疾病發(fā)展過程的自身免疫狀態(tài),而臨床癥狀判斷具有主觀性:早期非典型癥狀易被忽略,一旦出現(xiàn)典型的臨床癥狀,患者往往已經(jīng)伴隨明顯的免疫系統(tǒng)受損和重要臟器的器質(zhì)性病變甚至失代償,預后大大下降,亟需準確有效的早期診斷方法。近年來蛋白組學這一分子生物學的新技術為自身免
2、疫機制的闡明帶來了新的方法。隨著蛋白組學研究技術的進步,通過對疾病蛋白質(zhì)水平的綜合研究,該學科在分析SLE病理機制、提高早期診斷水平、發(fā)現(xiàn)疾病特異性標志物、確定治療靶位和藥物開發(fā)等方面表現(xiàn)出獨特的優(yōu)勢與前景。目前大部分的研究集中在血清、尿液這兩種標本上,較之該領域細胞外液的研究,免疫細胞胞內(nèi)蛋白組學的研究還處于相對空白的狀態(tài)。SLE發(fā)病機制中涉及多種免疫事件,包含各種免疫細胞參與。我們以包含了T、B、NK細胞等多種免疫細胞在內(nèi)的外周血單
3、個核細胞(PBMC)為切入點,就SLE對PBMC蛋白表達的影響做一探討,為運用蛋白組學方法研究SLE的早期發(fā)病及提示疾病活動提供依據(jù)。 方法:分別提取14名SLE患者及9名健康獻血者的PBMC,采用雙向電泳技術分離全蛋白質(zhì)組,對部分差異明顯、重復性高的蛋白質(zhì)點進行離子阱高效液相色譜串連質(zhì)譜分析(IonTrapHPLC-Chip-MS/MS),測定其肽序列標簽圖(PST),在互聯(lián)網(wǎng)蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫檢索鑒定差異蛋白。 結果:
4、 1.獲得了重復性較好的雙向電泳圖譜。 2.圖像分析:1名SLE患者、4名健康獻血者PBMC蛋白匹配點為1084個,其中SLE高表達及特異表達蛋白點為71個及17個,健康獻血者高表達及特異表達蛋白點為45個及20個。 3.對表達差異重復性高的30個蛋白質(zhì)點進行質(zhì)譜分析,經(jīng)數(shù)據(jù)庫檢索后,鑒定出28個蛋白質(zhì)的PST,與27個蛋白質(zhì)對應,分別為:3-磷酸甘油醛脫氫酶、酪氨酸翻譯合成酶、糖原磷酸化酶、轉酮醇酶、丙酮酸激酶M1
5、/M2型同功酶、丙糖磷酸異構酶、延長因子1α1、磷酸甘油酸激酶1、α烯醇化酶、斑聯(lián)蛋白、凝溶膠蛋白前體、脯氨酸絲氨酸蘇氨酸磷酸酶相互作用蛋白2、腺苷酸環(huán)化酶相關蛋白1、細絲蛋白C、細絲蛋白A、WD重復包含蛋白1、踝蛋白1、微管蛋白β鏈、整合素耦聯(lián)蛋白激酶、PDZ-LIM結構域蛋白7、酪氨酸蛋白激酶CSK、破骨細胞刺激因子1、膜聯(lián)蛋白A5、T復合體蛋白I亞單位、熱休克蛋白β1、熱休克同源蛋白71和動力蛋白I樣蛋白。其中在SLE患者PBMC
6、中高表達或特異表達的有凝溶膠蛋白前體、磷酸甘油酸激酶1、WD重復包含蛋白1、α烯醇化酶、破骨細胞刺激因子1、微管蛋白β鏈、膜聯(lián)蛋白A5和熱休克同源蛋白71這8類蛋白質(zhì),其余均在SLE患者中降低表達或不表達。 結論: 1.應用蛋白組學技術對SLE患者PBMC特異性蛋白進行初步篩選和鑒定,發(fā)現(xiàn)了丙糖磷酸異構酶、膜聯(lián)蛋白A5、熱休克同源蛋白71等27個與SLE發(fā)病相關,可能成為SLE生物學標簽的蛋白質(zhì)。 2.SLE患者
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