MDR1、MGMT基因在骨肉瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞化療耐藥中的重要作用.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)的目的是通過(guò)探討骨肉瘤細(xì)胞球和普通貼壁細(xì)胞中化療耐藥相關(guān)基因的表達(dá)差異，為下一步更有針對(duì)性的進(jìn)行靶向治療提供依據(jù)。實(shí)驗(yàn)方法采用：1，無(wú)血清懸浮培養(yǎng)骨肉瘤細(xì)胞系MG-63 和Well-5 形成骨肉瘤細(xì)胞球，分別采用免疫熒光技術(shù)檢驗(yàn)肉瘤球胚胎干細(xì)胞抗原Oct-4、Nanog 表達(dá)情況，并對(duì)肉瘤球進(jìn)行成骨、成脂定向誘導(dǎo)分化，鑒定肉瘤球的干細(xì)胞特性；2，以MTT 法檢測(cè)不同濃度梯度的化療藥物作用于細(xì)胞球和貼壁細(xì)胞48 小時(shí)后的OD 值；3

2、，半定量PCR 及流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞球和貼壁細(xì)胞耐藥基因MDR1 、MGMT、BCL-2 及其產(chǎn)物蛋白表達(dá)。然后以t 檢驗(yàn)分析相關(guān)數(shù)據(jù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)骨肉瘤細(xì)胞球具有較強(qiáng)的干細(xì)胞特征，能夠代表骨肉瘤干細(xì)胞，肉瘤球細(xì)胞較貼壁細(xì)胞對(duì)化療藥物的反應(yīng)性明顯較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。MDR1 、MGMT 基因及其蛋白在骨肉瘤細(xì)胞球中較骨肉瘤貼壁細(xì)胞高表達(dá)。最后我們得出的結(jié)論是：MDR1、MGMT 基因在骨肉瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞中高表達(dá)是化療耐