冬凌草甲素長循環(huán)脂質體的研究.pdf

1、冬凌草甲素是從冬凌草中提取分離的一種四環(huán)二萜類化合物，而冬凌草是應用于臨床最重要的中草藥之一。半個多世紀以前，就已證實冬凌草甲素具有免疫調節(jié)、抗炎、抗病毒等作用，特別是對上呼吸道感染有很好的治療作用。最近的實驗室和臨床研究表明，冬凌草甲素是有效的抗移植性腫瘤-前列腺癌、乳腺癌、大葉肺細胞癌等的藥物。由于冬凌草甲素易氧化、水溶性差、生物半衰期短，限制了作為臨床化療藥物的使用。論文旨在通過制備冬凌草甲素長循環(huán)脂質體，使藥物在血液中滯留時間延

2、長，濃度升高。論文對冬凌草甲素長循環(huán)脂質體制備工藝，冬凌草甲素長循環(huán)脂質體在小鼠血液和組織中的分布及冬凌草甲素長循環(huán)脂質體對荷H22肝癌小鼠的抗腫瘤作用進行了研究。 首先研究了冬凌草中冬凌草甲素的提取純化工藝。向冬凌草粉末中加入12倍量的95％乙醇，超聲提取3次，每次30min。再向冬凌草乙醇提取液中加入冬凌草用量24％的活性炭超聲脫色2次，每次20min。確定冬凌草甲素粗品的制備型高效液相色譜分離條件：色譜柱為μ Bondap

3、ackTMC18（80mm i.d×300mm，粒徑25μm～40μm）；柱溫：40℃；流動相：甲醇-水（50/50，V/V）；流速：60mL·min-1；檢測波長：238nm；進樣體積：10mL。將所收集的16min～23min的洗脫液經(jīng)蒸發(fā)濃縮，真空干燥，得冬凌草甲素白色粉末，經(jīng)高效液相檢測純度為99.0％，提取率65.4％。采用質譜、元素分析、紫外、紅外、核磁共振和高效液相色譜鑒定和驗證了提取物的化學結構。 研究冬凌草甲素

4、長循環(huán)脂質體的制備工藝和建立測定冬凌草甲素含量的高效液相色譜法。以包封率和載藥量為指標，考察了大豆卵磷脂、膽固醇、冬凌草甲素和聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（PEG2000-DSPE）的用量，水化介質的種類和體積，對包封率和載藥量的影響。通過試驗設計優(yōu)化了處方及制備工藝；選用LichrospherC18柱（4.6 mm i.d×250mm，粒徑5μm），柱溫40℃，以甲醇-水（70/30，V/V）為流動相，檢測波長238nm，在

5、流速1.0mL·min-1條件下進樣10μL測定冬凌草甲素含量。最佳工藝為大豆卵磷脂0.26g，膽固醇0.14g，冬凌草甲素0.04g，PEG2000-DSPE0.5g，純凈水30mL，制得的冬凌草甲素脂質體粒徑在100nm～200nm之間呈正態(tài)分布，平均粒徑150nm，包封率達95.4％，載藥量為4.24％。體外釋放結果表明，脂質體中冬凌草甲素在96h釋放基本完全。確定的處方較好，工藝可行，高效液相色譜法簡便、準確、快速，有利于控制冬

6、凌草甲素脂質體的質量。同法制備了冬凌草甲素普通脂質體（脂膜中不含PEG2000-DSPE）。 制備的冬凌草甲素長循環(huán)脂質體和普通脂質體在5℃進行貯存試驗，80d后各項指標保持穩(wěn)定，包封率基本沒有變化。結果表明，冬凌草甲素長循環(huán)脂質體和普通脂質體在5℃條件下貯存穩(wěn)定性良好。 研究冬凌草甲素長循環(huán)脂質體和普通脂質體在小鼠體內(nèi)的組織分布及藥代動力學特性。采用高效液相色譜法測定小鼠血液和組織中冬凌草甲素的濃度。對冬凌草甲素長循環(huán)

7、脂質體、冬凌草甲素普通脂質體和冬凌草甲素注射液在小鼠體內(nèi)分布特點和藥代動力學參數(shù)進行了比較。結果表明，冬凌草甲素長循環(huán)脂質體在肝、脾、肺、心及腎中的相對靶向率分別為2.10、1.95、1.34、2.39和0.84；冬凌草甲素普通脂質體在肝、脾、肺、心及腎中的相對靶向率分別為4.47、3.84、1.49、1.89和0.92。靜脈注射冬凌草甲素長循環(huán)脂質體后藥時曲線表明體內(nèi)過程符合二室模型，各相半衰期分別為T1/2α=3.18h，T1/2β

8、=98.36h，血藥濃度-時間曲線下面積AUC0-48h=888.91 h·μg·mL-1，中心分布容VC=19.17 mL·Kg-1；靜脈注射冬凌草甲素普通脂質體后藥時曲線表明體內(nèi)過程符合二室模型，各相半衰期分別為T1/2α-2.54h，T1/2β=33.98h，血藥濃度-時間曲線下面積AUC0-48h=356.69 h·μg·mL-1，中心分布容VC=20.01mL·Kg-1；靜脈注射冬凌草甲素注射液后藥時曲線表明體內(nèi)過程符合二室模

9、型，各相半衰期分別為T1/2α=0.63h，T1/2β=6.19h，血藥濃度，時間曲線下面積AUC0-48h=156.07 h·μg·mL-1，中心分布容VC-10.66mL·Kg-1。冬凌草甲素長循環(huán)脂質體延長了冬凌草甲素在小鼠體內(nèi)的循環(huán)時間。 采用動物移植性腫瘤實驗法，將H22小鼠肝癌細胞接種于昆明小鼠皮下，進行體內(nèi)抑瘤試驗，考察冬凌草甲素長循環(huán)脂質體、冬凌草甲素普通脂質體和冬凌草甲素注射液給藥后對實體瘤的抑瘤率。結果表明，