大熊貓糞便及環(huán)境中大腸桿菌耐藥性和質(zhì)粒介導(dǎo)ESBLs酶耐藥基因檢測.pdf

1、大熊貓(Ailuropodamelanoloca)是我國特有的珍稀大型野生動(dòng)物，屬國家一級(jí)瀕危保護(hù)動(dòng)物。隨著大熊貓人工圈養(yǎng)的增多，疾病發(fā)生是影響大熊貓繁育重要因素。大熊貓疾病發(fā)生以消化系統(tǒng)疾病為主，其中大腸桿菌是引起腸道感染的主要病原菌。獸醫(yī)臨床主要使用抗菌藥物，尤其是使用β-內(nèi)酰胺類藥物控制大熊貓大腸桿菌病發(fā)生。隨著藥物的廣泛使用或?yàn)E用，耐藥大腸桿菌菌株迅速出現(xiàn)，這給野生動(dòng)物感染性疾病的控制帶來了困難。大腸桿菌除了是重要的病原菌，也是

2、動(dòng)物體內(nèi)的重要共生菌，對共生菌耐藥性的調(diào)查，有助于了解耐藥菌株的產(chǎn)生和流行趨勢，為控制和減少耐藥的產(chǎn)生具有意義。
　　本研究于2012年7月到2013年7月，從成都大熊貓繁育研究基地，采集大熊貓糞便和環(huán)境樣本，分離鑒定出125株大腸桿菌共生菌，其中糞便源大腸桿菌96株，環(huán)境源大腸桿菌29株。采用藥敏試驗(yàn)紙片擴(kuò)散法，檢測了菌株對18種抗菌藥物（8種β-內(nèi)酰胺類藥物和10種非β-內(nèi)酰胺類藥物）的藥物敏感性。結(jié)果顯示，125株大腸桿菌共

3、生菌對β-內(nèi)酰胺類藥物氨芐西林、頭孢唑林和非β-內(nèi)酰胺類藥物四環(huán)素類、復(fù)方新諾明耐藥較嚴(yán)重（耐藥率范圍30％～75％），菌株對頭孢西丁等13種藥物耐藥率較低（耐藥率低均≤20％）。不同來源菌株耐藥性比較顯示，糞便源和環(huán)境源菌株除對頭孢唑林和四環(huán)素耐藥率有顯著差異(P＜0.05)外，對其余16種藥物耐藥率無顯著性差異(P＞0.05)。125株菌株耐藥譜型分布較廣，為3耐～13耐，55種耐藥譜型，優(yōu)勢耐藥譜型為TET/FLO/NOR。

4、>　　采用CLSI推薦的雙紙片確認(rèn)法和三維試驗(yàn)分別對ESBLs和AmpC酶進(jìn)行初步篩選，結(jié)果顯示125株大腸桿菌中產(chǎn)ESBLs菌株檢出32株，其中糞便源篩選出25株（檢出率為26.04％），環(huán)境源篩選出7株(檢出率為24.14％);125株菌株中產(chǎn)AmpC酶菌株檢出率0％。產(chǎn)酶菌株和非產(chǎn)酶菌株耐藥性比較顯示，產(chǎn)ESBLs陽性菌對頭孢呋辛、頭孢噻肟、鏈霉素、諾氟沙星、氟苯尼考、四環(huán)素、多西環(huán)素、復(fù)方新諾明顯著高于產(chǎn)ESBLs陰性菌(P＜0

5、.05)。產(chǎn)ESBLs陽性菌（3耐～13耐）比產(chǎn)ESBLs陰性菌（3耐～9耐）的多重耐藥譜型分布廣。
　　設(shè)計(jì)β-內(nèi)酰胺類耐藥基因(TEM、SHV、CTX-M、OXA、ampC)引物，采用PCR及PCR-測序法對相關(guān)基因進(jìn)行檢測。檢測結(jié)果顯示，125株菌中檢出4種基因，其中TEM20株（檢出率為16.00％），CTX-M14株(11.2％)，OXA7株(5.6％)，ampC16株(12.80％)?；驒z出率與菌株的來源沒有相關(guān)性，