慢性阻塞性肺疾病及糖尿病大鼠肺組織β-,2-受體mRNA表達(dá)水平的研究.pdf

1、目的：為了觀察慢性阻塞性肺疾病大鼠,糖尿病大鼠,慢性阻塞性肺疾病復(fù)合糖尿病大鼠肺組織β2腎上腺素能受體mRNA的表達(dá)及肺組織的病理改變,從而為該疾病的治療提供新的思路。
　　 方法60只雄性5周齡Wistar大鼠隨機(jī)分為慢性阻塞性肺疾病組(COPD組,n=14)、糖尿病組(DM組,n=16)、慢性阻塞性肺疾病合并糖尿病組(COPD+DM組,n=18),正常對(duì)照組(CONTROL組,n=12)。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢測(cè)肺組

2、織β2腎上腺素能受體mRNA的表達(dá),并進(jìn)行比較。每組大鼠從1開(kāi)始標(biāo)序,最后每組取前12號(hào)進(jìn)行分析,如果試驗(yàn)中前12號(hào)大鼠有死亡,從13號(hào)開(kāi)始依次遞補(bǔ)。所有大鼠預(yù)飼養(yǎng)1周,COPD組造模采用脂多糖(LPS)氣管滴入和煙熏的方法建模,DM組采用禁食12h后鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射的方法建模。COPD+DM組STZ法造DM模型成功后,與COPD組大鼠一起采用脂多糖氣管滴入加煙熏法造模。CONTROL組處理:首先正常進(jìn)食水及過(guò)夜禁食12h,

3、腹腔0.1mmol/LpH4.2-4.5的檸檬酸/檸檬酸鈉緩沖液,每只1ml。之后正常飼養(yǎng),不做任何處理。期間注意觀察動(dòng)物外表及性情的改變,及時(shí)更換墊料保持衛(wèi)生。40天后,空腹過(guò)夜,用10％水合氯醛3ml/Kg腹腔注射麻醉,開(kāi)胸取左肺上葉置于10％甲醛中,固定48h后,組織脫水,浸蠟,石蠟包埋切片,HE染色光鏡下觀察。取右肺中葉,放入液氮中保存,后用熒光實(shí)時(shí)定量PCR的方法檢測(cè)各組大鼠肺組織β2腎上腺素能受體mRNA的表達(dá)情況。

4、　　 結(jié)果
　　 1.肺組織學(xué)觀察:正常對(duì)照組呼吸道及肺泡結(jié)構(gòu)正常,支氣管纖毛排列整齊,肺泡結(jié)構(gòu)完整,無(wú)氣腫及炎癥。COPD組支氣管黏膜纖毛上皮排列紊亂,部分脫落,肺間質(zhì)及氣道管壁炎性細(xì)胞浸潤(rùn),管壁充血水腫,黏液分泌增加,有肺大皰形成。DM組支氣管上皮纖毛有倒伏現(xiàn)象,部分脫落,基膜下有大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn),COPD合并DM組部分支氣管黏膜纖毛上皮完全脫落,肺間質(zhì),氣管壁大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn),部分肺泡壁破裂融合成肺大皰。
　　

5、 2.PCR結(jié)果:4組大鼠肺組織β2-ARmRNA的ACt值分別為:COPD組(7.56±0.54),DM組(7.63±0.60),COPD+DM組(9.19±0.89),CONTROL,組(6.67±0.43),3個(gè)模型組與正常組比較β2-ARmRNA的表達(dá)明顯下降,P<0.01,COPD與DM組無(wú)明顯差別,P>0.05,COPD+DM組與COPD組、DM組相比β2-ARmRNA的表達(dá)明顯下降,P<0.01結(jié)論1.不僅COPD組大鼠