調節(jié)性樹突狀細胞對克羅恩病小鼠模型的治療作用.pdf

1、IL-10基因缺陷小鼠是病理表現(xiàn)與人類克羅恩病相近的實驗動物模型，表現(xiàn)為小腸及大腸的慢性增生性炎癥反應?？肆_恩病的病因尚不明確，目前學界的基本觀點是免疫負向調節(jié)機制的減弱造成了腸粘膜下反應性T細胞的過度活化和增殖，并分泌大量的炎性細胞因子造成了局部炎癥反應，導致腸黏膜免疫和屏障功能障礙，引起各種臨床癥狀。 根據目前對克羅恩病的研究概況并結合目前免疫學在調節(jié)性樹突狀細胞研究領域的新進展，我們以IL-10基因缺陷小鼠為克羅恩病動物模

2、型，嘗試調節(jié)性樹突狀細胞對克羅恩病的治療作用，為克羅恩病的治療提供新的思路。 本課題用新生小鼠脾臟組織培養(yǎng)的方法培養(yǎng)貼壁基質細胞，經過3~4周的培養(yǎng)可以得到以成纖維細胞、巨噬細胞、內皮細胞為主要成分的混合型基質細胞。通過CD11b磁珠抗體的陰性選擇去除混合基質中的巨噬細胞成分，再通過CD106抗體陽性分選得到單一的內皮型基質細胞成分。該細胞在體外擴增后用于調節(jié)性樹突狀細胞的培養(yǎng)。將成年鼠全骨髓細胞通過CD117（stem cel

3、l factor SCF受體）磁珠分選可得到造血前體細胞。以體外生長致60％融合度的內皮基質細胞作為誘導基質與磁性純化的骨髓造血前體細胞共培養(yǎng)，經過2周以上的誘導，獲得了高表達CD11b，B7-2，低表達Ia，CD11c的調節(jié)性樹突狀細胞。以OVA(ovalbumin 卵白蛋白)TCR轉基因小鼠OT-2小鼠的CD4 T細胞為反應細胞，以CD11C+Ia+成熟樹突狀細胞為刺激細胞，在400ng/ml OVA323-339多肽存在的條件下，

4、加入體外誘導的調節(jié)性樹突狀細胞檢測并確定其對CD4 T細胞增殖具有明顯的抑制作用。 以8周齡的IL-10基因缺陷鼠為早期克羅恩病模型，將體外誘導的調節(jié)性樹突狀細胞以每只小鼠2×106的數量腹腔注射作為治療，細胞移植后定期采集治療組與對照組小鼠眶靜脈血檢測血清中細胞因子TNFα及IL-6的含量的變化，8周后將實驗動物解剖并取結腸進行病理檢測。檢測發(fā)現(xiàn)，經調節(jié)性樹突狀細胞治療后的小鼠血清中炎性細胞因子TNFα及IL-6的水平沒有明顯