烏司他丁對急性肝功能衰竭大鼠肝組織中CD163-HO-1變化的影響.pdf

1、目的： 急性肝功能衰竭(acute liver failure，ALF)是一種嚴重的臨床綜合征，常導致大量的肝細胞壞死，病死率非常高，其發(fā)病機制和治療措施一直是研究的焦點。本實驗探討烏司他丁對急性肝功能衰竭的保護作用及對CD163和血紅素加氧酶-1(hemeoxygenase-1，HO-1)的影響。 方法： 通過腹腔聯(lián)合注射D-氨基半乳糖(D-Gal)和脂多糖(LPS)，建立急性肝功能衰竭大鼠模型。186只SD雄

2、性健康大鼠，隨機分為3組：Ⅰ組為對照組(6只)，腹腔注射0.9％NaCl2ml；Ⅱ組為模型組(75只)，腹腔聯(lián)合注射800mg/kg D-Gal和40μg/kg LPS，30min后腹腔注射0.9％NaCl0.4ml；Ⅲ組為烏司他丁干預組(75只)，造模后30min腹腔注射100，000U/kg烏司他丁。另外，Ⅱ、Ⅲ組均留15只大鼠觀察生存率。造模后分別于6、12、24、36和48h，各組隨機取6只大鼠，動態(tài)觀察肝組織病理形態(tài)，監(jiān)測肝生

3、化指標含量，免疫組織化學方法檢測肝組織CD163蛋白和HO-1蛋白的表達，逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法檢測肝組織CD163 mRNA和HO-1 mRNA的表達。實驗數據以均數±標準差(X±S)表示，采用SPSS13.0進行數據分析，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。 結果： 1、模型建立24h后，大鼠表現為極度虛弱，活動明顯減少，食欲減退，精神萎靡、嗜睡、少數發(fā)生抽搐。血膽紅素明顯升高，轉氨酶亦明顯升高。肝病

4、理學表現為肝組織結構破壞嚴重，出現彌漫性的大片壞死，細胞溶解，肝索解離，小葉結構紊亂，肝竇明顯擴張并出血，小葉內及匯管區(qū)可見大量炎癥反應細胞浸潤，提示急性肝功能衰竭動物模型成功建立； 2、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組大鼠生存率分別為100％(6/6)、40％(6/15)、66.7％(10/15)，Ⅲ組生存率較Ⅰ、Ⅱ組明顯提高(P<0.05)。生存曲線分析亦見模型組生存率比干預組低。 3、各組大鼠肝功能檢查示，造模后6h，血清丙氨酸氨基轉

5、移酶(alanine aminotransferase，ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(aspartate aminotransferase，AST)以及總膽紅素(total bilirubin，TBil)濃度均顯著升高，以12～24h之間最為顯著。模型組與干預組 ALT、AST于24h達峰，分別為8346.7±1363.1U/L，9766.7±1274.1U/L與4151.3±970.0U/L，4696.7±1476.9U/L，均較對

6、照組24.0±2.0U/L，82.3±16.9U/L高(F值分別為55.684，55.501，均P<0.01)，但干預組顯著低于模型組(P<0.01)；而TBil于36h達峰，模型組與干預組分別為93.0±8.9μmol/L和66.0±10.5μmol/L，較對照組5.3±0.6μmol/L高(F值為95.319，P<0.01)，干預組亦顯著低于模型組(P<0.01)。 4、免疫組織化學結果表明，相鄰切片CD163和HO-1的陽

7、性表達部位大體一致，多位于肝竇內及匯管區(qū)，CD163只表達在巨噬細胞胞漿內，而HO-1除此之外，造模后在部分肝細胞胞漿中也有表達。與對照組相比，模型組CD163蛋白和HO-1蛋白表達增加(P<0.01)，而烏司他丁干預組上升更加明顯(P<0.01)； 5、逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)結果顯示，對照組CD163 mRNA、HO-1 mRNA僅有少量表達，模型組6h已有升高(P<0.01)，至24h達高峰，隨后逐漸下降，但與

8、對照組比較，各時間點差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；干預組各時間點較模型組均增加，在36h達高峰(P<0.01)，隨后下降； 6、CD163 mRNA與HO-1 mRNA變化趨勢相同，用直線相關分析證明兩者有顯著的正相關性(r=0.830，P<0.01)。 結論： 1、腹腔聯(lián)合注射800mg/kg體質量D-Gal和40μg/kg體質量LPS可以一次性成功建造急性肝功能衰竭大鼠模型，大鼠狀態(tài)、死亡率、肝組織病理