納米級脂質(zhì)超聲微泡造影劑在超聲顯像及介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染中的應(yīng)用研究.pdf

1、第一部分超聲微泡破裂法聯(lián)合陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:探討超聲微泡破裂法聯(lián)合陽離子脂質(zhì)體(cationic liposome,CL)介導(dǎo)綠色熒光蛋白質(zhì)粒在肝癌細(xì)胞(HepG2)基因轉(zhuǎn)染的可行性,并探索最佳轉(zhuǎn)染條件。
　　方法:依次采用培養(yǎng)液中是否含有血清和不同的CL濃度、不同超聲輻照時間點(diǎn)、不同納米級脂質(zhì)微泡造影劑(nano-liposomal bubble,NB)濃度等處理因素進(jìn)行細(xì)胞基因轉(zhuǎn)染。熒光顯微鏡

2、和流式細(xì)胞儀檢測基因轉(zhuǎn)染效率,CCK-8法檢測細(xì)胞活性,以獲得優(yōu)化的轉(zhuǎn)染參數(shù)。
　　結(jié)果:血清能降低CL的細(xì)胞毒性,但對基因轉(zhuǎn)染效率無明顯影響,CL與質(zhì)粒DNA質(zhì)量比為4:1時可以達(dá)到相對高效低毒的轉(zhuǎn)染效果,細(xì)胞轉(zhuǎn)染率和存活率分別為(17.71±0.79)％和(91.28±0.76)%。CL聯(lián)合1小時時間點(diǎn)輻照超聲可以提高轉(zhuǎn)染率至(24.85±0.78)%(P<0.01),加入10%的NB可進(jìn)一步提高轉(zhuǎn)染率至(32.47±4.01

3、)%(P<0.05)。
　　結(jié)論:超聲微泡破裂法可以有效增強(qiáng)陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染,聯(lián)合應(yīng)用為基因治療提供了新思路。
　　第二部分納米級脂質(zhì)超聲微泡造影劑制備工藝優(yōu)化及其性質(zhì)研究
　　目的:比較自制納米級脂質(zhì)超聲微泡造影劑(nano-liposomal bubble,NB)和商用超聲微泡造影劑聲諾維(SonoVue)在體內(nèi)顯像效果和介導(dǎo)細(xì)胞基因轉(zhuǎn)染的差異。
　　方法:使用兩種不同的方法制備NBⅠ和NBⅡ。觀察

4、SonoVue、NBⅠ和NBⅡ?qū)ν谜８闻K和VX2肝腫瘤的超聲造影顯像效果差異。并使用上述三種微泡聯(lián)合超聲輻照來介導(dǎo)pEGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞,熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞轉(zhuǎn)染率,CCK-8法檢測細(xì)胞毒性。
　　結(jié)果:NBⅠ、NBⅡ在兔正常肝臟實(shí)質(zhì)的超聲造影顯影時間均長于SonoVue(P<0.05),且NBⅡ顯影強(qiáng)度最高(P<0.05)。三種微泡在兔VX2肝腫瘤的顯影效果相似,均為動脈相腫瘤環(huán)狀高增強(qiáng),實(shí)質(zhì)相腫瘤無增強(qiáng),