超聲及微泡造影劑介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染的方法學(xué)研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分:自制脂質(zhì)體超聲微泡造影劑特性和顯影效果
  目的:制備納米級脂質(zhì)體超聲微泡造影劑(Nano-LiposomalBubble,NB),并檢測其基本特性。
  方法:采用逆向蒸發(fā)法制備脂質(zhì)體,用聲振法制備NB后觀察其形態(tài),檢測其平均粒徑、表面電位及濃度等物理特性;在脫氣水中分別注入生理鹽水、NB及SonoVue(200μL),觀察顯影效果;分別經(jīng)兔耳緣靜脈團(tuán)注生理鹽水、NB及SonoVue(2.0ml/kg),動態(tài)觀察

2、兔心臟及肝的增強(qiáng)情況。
  結(jié)果:NB于鏡下觀察:粒徑范圍133.1~199.5nm,平均粒徑為(171.6±30.82)nm,平均電位為-(1.92±0.65)mV,分布均勻,濃度為(3.8~5.6)×108/ml。常溫下造影劑放置1周、1月后觀察,基本特性無明顯改變。體外顯影結(jié)果顯示:NB與SonoVue一樣具有顯著的顯影效果。體內(nèi)造影后觀察:NB與SonoVue均能明顯增強(qiáng)兔心臟及肝的二維灰階顯像。
  結(jié)論:NB性質(zhì)

3、穩(wěn)定,形態(tài)好,粒徑均一,與商用造影劑SonoVue一樣具有良好的顯影效果。由于其粒徑小且基于脂質(zhì)體基礎(chǔ)上易被修飾,因此在超聲分子影像及基因、藥物傳遞方面具有廣闊的應(yīng)用前景。
  第二部分:超聲輻照聯(lián)合PEI介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染的實驗研究
  目的:探討超聲聯(lián)合聚乙烯亞胺(PEI)在促進(jìn)肝癌細(xì)胞(HepG2)的基因轉(zhuǎn)染中有無協(xié)同作用。
  方法:選用工業(yè)用和實驗用PEI為研究對象。用錐蟲藍(lán)拒染法檢測細(xì)胞成活率,選取合適的PEI濃

4、度與綠色熒光蛋白基因(EGFP)質(zhì)粒DNA共孵育,制備陽離子復(fù)合物(PEI/DNA)導(dǎo)入HepG2細(xì)胞中和/或行超聲輻照,24h后于熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白的表達(dá)情況,流式細(xì)胞儀定量分析轉(zhuǎn)染率。超聲輻照參數(shù):1MHz,1.0W/cm2,20s,脈沖做功周期為20%。
  結(jié)果:超聲可促進(jìn)質(zhì)粒DNA在HepG2細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)染。PEI對細(xì)胞有毒性,當(dāng)PEI濃度為0.001%時細(xì)胞成活率約為70%,選此濃度用于基因轉(zhuǎn)染實驗。兩種PE

5、I復(fù)合物均能顯著促進(jìn)質(zhì)粒DNA的基因轉(zhuǎn)染,其轉(zhuǎn)染率高于單純輻照超聲介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),而兩種PEI的轉(zhuǎn)染率工業(yè)用組(15.42±4.71)%,實驗用組(12.27±3.58)%的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),加入PEI聯(lián)合輻照超聲后轉(zhuǎn)染率反而下降(P<0.01)。
  結(jié)論:PEI和超聲均能促進(jìn)HepG2細(xì)胞基因轉(zhuǎn)染效率,但PEI聯(lián)合輻照超聲后轉(zhuǎn)染率明顯下降,二者沒有協(xié)同作用。工業(yè)用與實驗用PEI

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