超聲微泡造影劑介導(dǎo)血管生成素-1基因治療下肢動(dòng)脈缺血.pdf

1、目的： 探討超聲微泡造影劑介導(dǎo)血管生成素-1基因治療下肢缺血的療效，為臨床治療下肢缺血提供一個(gè)有效的治療手段； 方法： (1)動(dòng)物模型建立：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為健康新西蘭大白兔15只，隨機(jī)分為三組，行左下肢股動(dòng)脈(高位)及其分支切斷結(jié)扎術(shù)，造成左下肢缺血模型。 (2)超聲微泡造影劑的準(zhǔn)備：實(shí)驗(yàn)所采用微泡造影劑為脂質(zhì)超聲造影劑(利載顯)。 (3)質(zhì)粒的準(zhǔn)備：實(shí)驗(yàn)所用質(zhì)粒是pEGFP/Ang-1，將質(zhì)粒通過(guò)感受

2、態(tài)大腸桿菌進(jìn)行轉(zhuǎn)化并擴(kuò)增。 (4)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染：A組采用微泡造影劑和pEGFP/Ang-1質(zhì)粒的混合物進(jìn)行肌肉注射，并同時(shí)進(jìn)行超聲輻照；B組單純采用pEGFP/Ang-1質(zhì)粒進(jìn)行肌肉注射；C組采用生理鹽水進(jìn)行肌肉注射。 (5)動(dòng)脈造影：術(shù)后4周行腹主動(dòng)脈插管造影，在DSA機(jī)下觀察新生血管和側(cè)支循環(huán)形成的狀況； (6)免疫組化：取內(nèi)收肌局部組織，10％福爾馬林固定，石蠟切片，進(jìn)行Ang-1免疫組化染色； (7

3、)HE染色：觀察新生血管情況和毛細(xì)血管的計(jì)數(shù)。使用SPSS11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析. 結(jié)果： (1)動(dòng)脈造影：A組兔子缺血下肢的新生血管和側(cè)支循環(huán)較B組多；而A組和B組又比C組明顯增多； (2)免疫組化：A組肌細(xì)胞胞漿內(nèi)顯示Ang-1免疫陽(yáng)性反應(yīng)的棕褐色深，B組胞漿內(nèi)有部分棕褐色，而C組胞漿內(nèi)棕褐色則較少。 (3)新生血管計(jì)數(shù)：A組兔子缺血下肢的新生血管數(shù)明顯較B組多，而A組和B組又比C組明顯增多，且有