雙靶向脂質(zhì)超聲微泡造影劑評價缺血再灌注心肌的實驗研究.pdf

1、第一部分雙靶向脂質(zhì)超聲微泡造影劑的制備與體外尋靶效果實驗研究
　　 目的:制備攜載兩種抗體的雙靶向脂質(zhì)微泡超聲造影劑，并檢測其基本理化性質(zhì)，并觀察其對體外缺氧細胞的尋靶效果。
　　 方法:將一定比例的二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、二苯基磷?；B氮化物(DPPA)、生物素化聚乙二醇二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000-biotin)及甘油、PBS溶液等混合均勻后，分別先后與鏈霉親和素(streptavidin)

2、和P選擇素單克隆抗體及ICAM-1單克隆抗體孵育制得雙靶向脂質(zhì)超聲微泡造影劑;通過光學(xué)顯微鏡及電子顯微鏡分別觀察并測定微泡形態(tài)、均一性、分散度以及濃度，利用Malvern激光粒徑檢測儀及表面電位檢測儀分別檢測微泡粒徑與分布情況、表面電位等物理特性，利用流式細胞術(shù)測定抗體接合效率;通過培養(yǎng)人臍靜脈血細胞，建立急性缺血模型，評價雙靶向脂質(zhì)超聲微泡造影劑的體外尋靶能力。
　　 結(jié)果:雙靶向脂質(zhì)超聲微泡造影劑大小較為均一，平均濃度為（3

3、.79±0.4）×109/ml，平均粒徑為(1668±260.2) nm、平均表面電位為-1.24 mV;對缺血內(nèi)皮細胞的粘附作用顯著。流式細胞儀檢測其抗體結(jié)合效率為81.47％。
　　 結(jié)論:雙靶向超聲微泡造影劑粒徑均一，分散度良好，帶負電荷，其物理性質(zhì)適應(yīng)毛細血管內(nèi)流動和邊集，為動物實驗中實時缺血炎癥區(qū)域顯影創(chuàng)造條件。
　　 第二部分雙靶向超聲微泡造影劑評價缺血再灌注心肌的實驗研究
　　 目的:制備攜載P選擇

4、素單抗及ICAM-1單抗的雙靶向脂質(zhì)超聲微泡造影劑，活體小鼠心肌缺血再灌注模型觀察并評價其顯像效果。
　　 方法:采用生物素-親和素法將微泡與生物素化抗體連接，制得攜載P選擇素單抗及ICAM-1單抗的雙靶向脂質(zhì)超聲微泡造影劑，免疫熒光染色分別標記兩種抗體，激光共聚焦顯微鏡觀察造影劑與抗體的連接情況，建立小鼠心肌缺血再灌注模型分別檢測各型造影劑對缺血炎性組織的顯像情況，Sonomath系統(tǒng)進行定量分析。
　　 結(jié)果:免疫熒

5、光染色實驗顯示單靶向脂質(zhì)微泡超聲造影劑表面可見明亮的紅色環(huán)狀熒光，雙靶向超聲微泡造影劑因同時包繞兩種熒光物質(zhì)顯示黃色熒光，流式細胞儀檢測其抗體結(jié)合效率分別為98.65％和81.47％，24只小鼠中有22只建模成功，示部分左室前壁心肌缺血。MCE顯像后記錄的圖像經(jīng)Sonomath超聲影像分析儀顯示雙靶向脂質(zhì)微泡超聲造影劑有更高的增強顯像效果(P＜0.01)和延遲顯像效果(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:本實驗中，利用生物素-親和素法