夏枯草對腫瘤細胞多藥耐藥基因表達影響的研究.pdf

1、背景和目的:根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)的報告,2000年全球惡性腫瘤死亡例數(shù)已經(jīng)超過700萬,占全部死亡人數(shù)的12％,在發(fā)展中國家占人口總數(shù)的9％,在發(fā)達國家占21％。我國是發(fā)展中國家,惡性腫瘤占居民死亡原因的19％,居常見死亡原因的首位。目前,化學藥物治療是治療人體惡性腫瘤的重要手段,盡管不斷有新的化療藥物和化療方案推出,但腫瘤細胞對多種化療藥物產(chǎn)生的多藥耐藥性仍是化療失敗的主要原因之一,也是腫瘤治療的一大難題。
　　多藥耐藥性

2、(multidrug resistance,MDR)是指腫瘤細胞對一種抗腫瘤藥物產(chǎn)生抗藥性的同時,對結(jié)構(gòu)和作用機制不同的抗癌藥物產(chǎn)生交叉耐藥性。MDR形成的機理非常復雜,腫瘤細胞可以通過不同途徑導致MDR產(chǎn)生,而一種MDR細胞可以同時存在多種抗藥性機制。根據(jù)美國惡性腫瘤協(xié)會估計,每年惡性腫瘤患者約49萬例死亡,其中90％以上患者的死亡受到耐藥在不同程度上的影響。因此,探求MDR現(xiàn)象產(chǎn)生的機制及尋求腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑或逆轉(zhuǎn)方法已經(jīng)成為國內(nèi)

3、外的研究的熱點。近年來,研究比較多的多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑維拉帕米(verapamil,VER)等及反義RNA技術(shù)、反義寡核苷酸技術(shù)、核酶技術(shù)以及基因敲除術(shù)為主導的基因逆轉(zhuǎn)方法或因大劑量造成的明顯的毒副作用,或因高成本、高技術(shù)難度,都使他們在臨床應用上受到限制。作為我國國粹的中草藥,治療腫瘤的歷史十分久遠,因其具備“廉價、毒性小、安全范圍大、廣譜性強、作用靶點多”等作為耐藥腫瘤逆轉(zhuǎn)劑的諸多優(yōu)勢,加之很多中草藥復方或單體本身就有一定的抗腫瘤作用,

4、所以在耐藥性腫瘤逆轉(zhuǎn)劑的研究中,受到越來越廣泛的關(guān)注。近年來文獻報告已經(jīng)證實,中藥具有逆轉(zhuǎn)MDR的生物活性成分:如黃酮類化合物、漢防已甲素、人參皂甙、雄黃、欖香烯以及某些中藥復方都具有體外逆轉(zhuǎn)MDR的作用。因此,中藥在篩選MDR逆轉(zhuǎn)劑的研究中具有很廣闊的應用前景。夏枯草(Prunella vulgaris,PV)為唇形科PV屬植物PV的干燥成熟果穗,具有清火明目、軟堅散結(jié)之功效,其對多種腫瘤細胞有抑制增殖及誘導凋亡的作用,但PV在逆轉(zhuǎn)多

5、藥耐藥方面的研究鮮有報道。中國醫(yī)科大學2006屆碩士研究生周新穎的研究證實了PV可部分逆轉(zhuǎn)乳腺癌細胞耐藥,但對人Burkitt淋巴瘤細胞株Raji、人乳腺癌細胞株MDA-MB-435s及人肝癌細胞SMMC-7721耐藥的逆轉(zhuǎn)尚未見報道。本研究運用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈式反應(RT-PCR)技術(shù)觀察非毒性細胞劑量下不同濃度的PV對Raji細胞、MDA-MB-435s細胞和SMMC-7721細胞多藥耐藥基因表達的影響,探討可能存在的耐藥逆轉(zhuǎn)機制,以

6、期找到具有臨床應用前景的耐藥逆轉(zhuǎn)治療藥物。
　　方法:1、MTT法測定阿霉素(ADM)單用和PV與不同濃度梯度ADM聯(lián)合應用對Raji細胞、MDA-MB-435s細胞和SMMC-7721細胞的半數(shù)抑制率(IC50)。2、運用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈式反應(RT-PCR)檢測非細胞毒性劑量下不同濃度的PV對Raji細胞、MDA-MB-435s細胞和SMMC-7721細胞mdr1基因表達水平的影響。
　　結(jié)果：1、PV對Raji細胞、MD

7、A-MB-435s細胞和SMMC-7721細胞的抑制作用具有劑量依賴性。通過劑量效應曲線可確定PV的非細胞毒性劑量(生長率>95％)分別為10.0μg/ml、20.0μg/ml、30.0μg/ml,PV對三種腫瘤細胞的半數(shù)抑制濃度IC50分別為31.67±0.89μg/ml、63.03±1.22μg/ml、81.45±2.16μg/ml。ADM對三種腫瘤細胞的IC50分別為1.28±0.66μg/ml、1.87±0.85μg/ml、2.

8、39±1.58μg/ml,選用非細胞毒性劑量濃度的PV與不同濃度的ADM聯(lián)合應用,其對三種腫瘤細胞的IC50分別下降為0.77±0.35μg/ml、1.38±0.84μg/ml、1.96±1.19μg/ml。從結(jié)果中可以看出,PV與ADM共同作用于腫瘤細胞時,ADM的IC50值與ADM單獨作用于腫瘤細胞時相比結(jié)果具有顯著性差異(P<0.05)。2、PV對腫瘤細胞多藥耐藥基因mdr1基因的影響,從電泳圖上可以看出,Raji細胞、MDA-M

9、B-435s細胞和SMMC-7721細胞均有mdr1基因的表達,且SMMC-7721細胞表達最強,MDA-MB-435s細胞表達居中,Raji細胞表達最弱,這與臨床上三種腫瘤的耐藥性程度相一致。并且經(jīng)過非毒性細胞劑量下不同濃度的PV處理的Raji細胞、MDA-MB-435s細胞和SMMC-7721細胞的mdr1基因的表達要比對照組細胞的表達弱;隨著PV劑量的增加,對腫瘤細胞的多藥耐藥基因mdr1基因的表達下調(diào)作用越明顯(P<0.05)。

10、
　　結(jié)論：1、PV能抑制Raji細胞、MDA-MB-435s細胞和SMMC-7721細胞的增殖,抑制作用呈明顯的劑量依賴性。2、PV可逆轉(zhuǎn)Raji細胞、MDA-MB-435s細胞和SMMC-7721細胞對ADM的耐藥性。3、Raji細胞、MDA-MB-435s細胞和SMMC-7721細胞存在原發(fā)多藥耐藥性,mdr1基因的過表達可能是三種腫瘤細胞MDR形成的分子基礎(chǔ)之一。4、在非細胞毒性劑量下不同濃度的PV通過調(diào)節(jié)mdr1基因的表