降溫順序?qū)ωi主動脈瓣制備保存影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：確定豬主動脈瓣保存過程中在相變點(diǎn)時(shí)較為合理的降溫順序。促進(jìn)牛物瓣膜保存技術(shù)的提高，進(jìn)一步延長生物瓣膜的使用壽命。 方法：本課題于豬宰殺后20min內(nèi)清潔條件下取出心臟，立即置于冰生理鹽水運(yùn)送，無菌條件下取帶瓣主動脈，清洗、修剪、將瓣環(huán)置入含抗生素的M199營養(yǎng)液中。37℃下孵化、滅菌處理，進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢測。將滅菌后的心臟瓣膜用M199液漂洗三次，漂洗后先在4℃冰箱平衡15min。然后瓣膜置入凍存管中，加入凍存液(含10％二甲

2、基亞砜、10％胎牛血清、80％M199)后標(biāo)記，放入程控降溫儀，設(shè)定程序，測量豬豐動脈瓣膜的相變點(diǎn)(0℃--4℃)，并以-1℃/min的速率通過程序降溫降至0℃，然后在相變點(diǎn)時(shí)以不同的降溫速率(分別以-1℃/rain、-2℃/min、-3℃/min、-4℃/min、-5℃/min分為5組)降溫，待降至-4℃時(shí)，繼續(xù)以-1℃/min的速率降溫至-60℃，將程序降溫儀降溫后瓣膜組織置于-80℃的冰箱，使其在-80℃恒溫狀態(tài)下保存24小時(shí)后移

3、入液氮貯存，14天后復(fù)溫檢測。在各實(shí)驗(yàn)組之間，通過對瓣膜組織結(jié)構(gòu)、超微結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)及牛物力學(xué)等特性的評價(jià)，探討相變點(diǎn)時(shí)生物瓣組織結(jié)構(gòu)不同降溫速率中的最佳速率，用以確定生物瓣保存過程中最佳的程序降溫順序，進(jìn)一步延長生物瓣膜的使用壽命。 結(jié)果：豬主動脈瓣膜相變點(diǎn)為0℃--4℃；組織學(xué)結(jié)果顯示，-4℃/min組瓣膜表面內(nèi)皮細(xì)胞較完整。各層結(jié)構(gòu)清晰可辨，纖維網(wǎng)架結(jié)構(gòu)保持完整。其他各組內(nèi)皮細(xì)胞脫落多見，內(nèi)皮下膠原較為松散，偶有膠原纖維斷

4、裂現(xiàn)象；掃描電鏡顯示-4℃/min組瓣膜表面內(nèi)皮細(xì)胞覆蓋較完整，其他各組可見散在或小片狀內(nèi)皮細(xì)胞，較為局限。細(xì)胞下纖維成分均清晰可見；透射電鏡示-4℃/min組細(xì)胞形態(tài)較為一致，細(xì)胞呈卵圓形或柱形，細(xì)胞表面有絨毛狀突起，細(xì)胞內(nèi)可見大量質(zhì)膜小泡、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體等結(jié)構(gòu)。其他各組細(xì)胞溶解、破裂現(xiàn)象較為常見；各組瓣葉厚度未見明顯差異(F=0.807；P=0.54)；瓣膜組織含水量隨著組別呈逐漸增高趨勢(F=8.238；P=0.001)；組織熱皺

5、縮溫度-4℃/min組與其他各組均有顯著性差異(F=4.674；P=0.012)。其余各組之間無顯著性差異；生物力學(xué)特性-4℃/min組與其他四組瓣膜相比破壞強(qiáng)度(F=3.904；P=0.023)及伸長比(F=15.752；P=0.000)有顯著性差異，其他各組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：0℃--4℃為豬主動脈瓣膜的相變溫度；相變點(diǎn)時(shí)增加降溫速率可以改善瓣膜保存狀況；豬豐動脈瓣膜制備保存過程中以-1℃/min的降溫速率常規(guī)降溫，相